核酸检测试剂盒(定磷比色法)

产品货号：BA1826

产品规格：50T

产品简介：

核酸(nucleic acid)是由许多核苷酸聚合成的生物大分子化合物，是生命的基本物质，广泛存在于所有动植物细胞、微生物体内，根据化学组成不同，核酸可分为脱氧核糖核酸(简称DNA)和核糖核酸(简称RNA)。核酸分子中含有一定比例的磷，DNA中磷含量为9.2%，RNA中磷含量为9.0%

尚宝生物 核酸检测试剂盒(定磷比色法)检测原理是在强酸条件下，核酸分子中的有机磷转化为无机磷，后者与钼酸铵形成黄色的磷钼酸铵，随后还原剂把高价钼离子还原成低价钼离子，进而形成蓝色的钼蓝，在一定浓度范围蓝色深浅与磷含量成正比，通过分光光度计在660nm处检测吸光度，通过检查标准曲线，获得磷含量，如果待测样品中有无机磷，应予以扣除，否则结果偏高。本试剂盒仅用于科研域，不宜用于临床诊断或其他用途。

产品组成：

自备材料：

1. 蒸馏水、浓硫酸

2. 离心管或试管

3. 容量瓶

4. 凯氏烧瓶

5. 水浴锅

6. 722型分光光度计

操作步骤(仅供参考):

1. 稀释标准品：取磷标准(1mg/ml)，按磷标准(1mg/ml)：蒸馏水=1：49的比例稀释标准品至20μg/ml。取干净离心管或试管，按下表进行标准品浓度的依次稀释，获得不同浓度的多个磷标准。

2. 制备待测样液：取样品(如核酸粗提物)0.05g，加入少量蒸馏水溶解（如果难以溶解，可滴加样品处理液至溶液pH=7.0），准确定容至25ml(此溶液样品含量2mg/ml)，即为待测样液。

3. 制备总磷测定液：取上述待测样液(2mg/ml)1.0ml，置于50ml凯氏烧瓶，加入1.0ml浓硫酸和一粒玻璃珠，凯氏烧瓶内插入一个小漏斗，放在通风橱内加热至溶液呈黄色时取出，稍冷却后加入2～3滴H2O2，继续消化至透明，表示消化完成。冷却，转移消化液至100ml容量瓶中，用少量蒸馏水洗涤凯氏烧瓶2次，洗涤液一并倒入容量瓶，加蒸馏水定容至100ml，混匀后待用，即为总磷测定液。

4. 无机磷测定液(选做)：取上述待测样液(2mg/ml)1.0ml，置于100ml容量瓶中，加蒸馏水定容至100ml，混匀后待用，即为无机磷测定液。

5. 磷测定：按下表进行操作，依次加入下列溶液，如果样品中有无机磷，应同时检测无机磷，并将无机磷扣除。

6. 45℃孵育10min，冷却后测定660nm处吸光度(即为A660)，分别为A_无机磷、A_总磷。

计算：

以磷含量(μg)为横坐标，吸光度为纵坐标作图，得标准曲线。

A有机磷=A总磷－A无机磷

由标准曲线查的有机磷的质量(μg)，再根据测定时取样ml数，求得有机磷的质量浓度 (μg/ml)。按下列公式计算样品中核酸的质量分数。

核酸质量分数(%)=CV×11/m×100%

式中：C=有机磷的质量浓度(μg/ml)

V=样品的总体积(ml)

11=1μg磷相当于11μg核酸

m=样品质量(μg)

注意事项：

1. 上述低温试剂避免反复冻融，以免失效或效率下降。

2. 待测样本如不能及时测定，应置于2~8℃保存，3天内稳定。

3. 如果样品浓度过高，应用蒸馏水稀释后重测，结果乘以稀释倍数。

4. 消化时间应视样品不同而不同，如果是RNA样品，一般在800W电炉上消化45min。

有效期：6个月有效。

原创作者：上海尚宝生物科技有限公司