产品货号：11065

产品规格：50T/100T

产品简介：

用分子生物学技术研究复杂的基因组，先要求制备纯净的高分子质量DNA，一般分为两个步骤，先裂解细胞、溶解DNA，接着采用酶学或化学方法去除蛋白、RNA以及其他大分子。尚宝生物 哺乳动物基因组DNA抽提试剂盒(Mammalian genomic DNA extraction kit)采用经典的蛋白酶K处理法，可以抽提到100～150kb以上的基因组 DNA，提取的基因组DNA可用于Southern杂交、基因组DNA的PCR扩增及基因组DNA文库的构建等。该试剂盒的提取效率大致为，从1g组织可以提取到约150～200μg 100kb以上的基因组DNA，从10 ～10 Hela细胞可以提取到约5～50μg 100kb以上的基因组DNA。该试剂盒仅用于科研域，不适用于临床诊断或其他用途。

产品组成：

自备材料：

1. 组织或培养细胞

2. PBS

3. 无水乙醇、70%乙醇

4. 25:24:1 酚//异戊醇

操作步骤 (仅供参考) ：

1. 准备样品：

①组织样本：切下组织并立即剪成小块，置于液氮中冻结。将100mg～1g冻结的组织用预冷的研钵和研杵研碎或用锤子将其捣成碎末。培养细胞：收集贴壁生长或悬浮生长细胞培养液，贴壁生长细胞需先用胰蛋白酶消化液消化，再用PBS清洗一次。4℃离心机，1000～2000g离心1～2min，弃上清。用1～10ml预冷的PBS再次悬浮离心，如此2次洗涤。

2. 每1ml样品裂解液加入5μl的蛋白酶K溶液，混匀。每50mg组织或5×107细胞用0.5～0.6ml样品裂解液悬浮，悬浮应，不应留下结块。

3. 充分混匀，50℃振荡下温育12～18h或过夜。

4. 加入等体积25:24:1酚//异戊醇，轻轻混合，尽可能减少对DNA的剪切。

5. 吸出酚相及中间相(可以吸除少量靠近中间相的水相液体)，剩余的水相用等体积酚//异戊醇再抽提一次。重复该步骤1次。

6. 吸取上层液(水溶液)250～300μl 至新EP管中，加入等体积无水乙醇和1/4体积的乙酸铵溶液，颠倒混匀数次。

7. 4℃ 10000g 1min，弃上清。

8. 加入70%乙醇，4℃ 10000g 1min，弃上清。重复该步骤一次。

9. 尽量吸除残余的乙醇，空气干燥，等到不到明显液体时，立即加入50～100μl Nuclease Free Water溶解DNA，4℃或-20℃保存。注意：不可过分干燥基因组DNA沉淀，否则会难溶解。如果发现DNA沉淀难以溶解，可以在4℃用摇床缓慢摇动过夜，以溶解DNA沉淀。

10. A ₂₆₀ /A ₂₈₀ 处检测DNA纯度，高纯度的DNA一般A ₂₆₀ /A ₂₈₀＞1.8。

注意事项：

1. 如果打算提取大片段的基因组DNA，应尽量避免基因组DNA的物理性剪切。例如避免剧烈振荡含有基因组DNA的样品，可以用剪掉枪头尖的枪头吸取基因组DNA的样品。

2. 准备细胞样品时，如果细胞量过少(＜3×10⁷ )，应0.3ml含蛋白酶K的样品裂解液。

3. 为避免高分子质量DNA被剪切，可以不采用乙醇沉淀DNA，可用透析袋替代乙醇：在100倍体积的TE buffer中至少透析2次，所用取全部时间应＞24h。

4. 不可过分干燥基因组DNA沉淀，否则会难溶解。

5. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

有效期：6个月有效。

原创作者：上海尚宝生物科技有限公司