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技术文章
六胺银染色液(改良Grocott-苏木素法)
点击次数:39 发布时间:2023/8/7 11:29:43
产品货号:M20151
产品规格:6×50ml/6×100ml
产品简介:
六胺银染色液是一种经典显示基底膜的方法。经过Grocott改良之后,组织经铬酸氧化,使真菌内的黏多糖暴露出醛基,醛基把六胺银还原为黑色的金属银。氯化金可使金属银转变为更稳定的金属金,同时使背景更清晰。海波可以固定并洗去未还原的银离子。
本法采用苏木素复染(也可根据需要自行添加伊红对染),对卡氏肺囊虫、曲霉和白色念珠菌的显示效果很好,可看到囊虫或真菌与周围组织的关系。本产品仅用于科研域,不得用于临床诊断或其他用途。
产品组成:
产品名称 | 6×50ml | 6×100ml | 保存条件 | |
试剂(A):氧化剂 | 50ml | 100ml | 室温,避光 | |
试剂(B):漂白剂 | 50ml | 100ml | 室温 | |
试剂(C): 六胺银工作液 | C1:银溶液 | 1.5ml | 3ml | 4℃,避光 |
C2:六胺溶液 | 25ml | 50ml | 4℃,避光 | |
C3:硼砂溶液 | 25ml | 50ml | 室温 | |
C1、C2、C3按操作说明混合配制。 | ||||
试剂(D):氯化金溶液 | 50ml | 100ml | 4℃,避光 | |
试剂(E):海波溶液 | 50ml | 100ml | 室温 | |
试剂(F):苏木素复染液 | 50ml | 100ml | 4℃ |
自备材料:
1. 蒸馏水、系列乙醇、封片剂;
2. 水浴锅或恒温箱;
3. 环保浸蜡脱蜡透明液或二甲苯。
操作步骤(仅供参考):
1. 组织固定于甲醛固定液中,常规脱水包埋,切片4~5μm,脱蜡至水洗。
2. 切片入氧化剂氧化20min,流水稍洗。
3. 入漂白剂处理1min,以除去氧化剂。
4. 流水冲洗5min,蒸馏水浸洗2次,每次30~60s。
5. 配制六胺银贮备液:银溶液:六胺溶液=6:100混合即成,会有少量沉淀产生,充分溶解即可。可4℃保存,3个月有效。
6. 配制六胺银工作液:六胺银贮备液:硼砂溶液=106:100混合,六胺银工作液是一次性的,不能久放。配制后可放入60℃温箱中预热30min,再放人切片进行染色。
7. 切片放入配制好的预热至60℃六胺银工作液中,加盖60℃恒温染色20~60min,切片呈淡黄色即可取出,经水洗后显微镜观察是否有菌体出现。如有淡棕色菌体出现,应每隔5~10min观察1次以控制菌体着色深浅,直至显色理想。
8. 入蒸馏水中清洗。
9. 用氯化金溶液调色1~2min,蒸馏水洗20~40s。
10. 置于海波溶液2min,流水冲洗5min。
11. 滴加苏木素复染液染色5~10min,流水冲洗5~10min。
12. 常规脱水,二甲苯或环保浸蜡脱蜡透明液透明,中性树胶封固。
真菌、上皮粘液、卡氏肺囊虫包囊壁 | 黑色或棕黑色 |
染色结果:
注意事项:
1. 实验中所用玻璃器皿,应预先用硫酸洗液浸泡并用蒸馏水冲洗干净、烤干。
2. 六胺银储备液可4℃保存,3个月有效。
3. 配制好的六胺银工作液是一次性的,不宜久置。
4. 六胺银工作液配制后应先放入温箱中预热,温度要达到60℃时,再放人切片进行染色;如用水浴锅代替恒温箱,需将温度设定在48~50℃,否则切片会很快变黑而难以掌握,一般建议在恒温箱中孵育染色。
5. 在低倍镜检时菌体不宜着色太黑,否则在高倍镜下观察则不够清晰透亮,特别需注意菌体成堆的地方的显色。
6. 氯化金调色时一定要在显微镜下观察。
7. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
保存条件:4℃,避光6个月。
原创作者:上海尚宝生物科技有限公司