离子结合性果胶（ISP）含量检测试剂盒（微量法）

产品货号：BA1209

产品规格：100管/48样

产品简介：

果胶（Pectin）是构成细胞初生壁和中胶层的主要成分，对细胞起着软化和黏合作用。果胶间以Ca²⁺桥及其他离子键、氢键、糖苷键、酯键和苯环偶联的方式交联，通过不同的抽提方法可以提取各种形式的果胶，如水溶性果胶（WSP）、离子结合型果胶（ISP）和共价结合果胶（CSP）。

利用带有螯合剂的酸性提取液提取离子结合型果胶（ISP），其在酸性条件下水解生成半乳糖醛酸，后者在硫酸溶液中与咔唑进行缩合反应形成紫红色的化合物，生成物质在530nm处有吸收峰。

注意：实验之建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者 增加样本量进行检测。

产品内容：

溶液的配制：

1. 提取液一：80%乙醇，自备。即将80mL无水乙醇和20mL蒸馏水混合。提供一个125mL空瓶。

2. 试剂一：浓硫酸30mL，自备。

3. 标准品：10mg半乳糖醛酸。临用加入0.943mL提取液三，配成50μmol/mL的标准液。

技术指标：

检出限：0.0946μmol/mL

线性范围：0.1-2μmol/mL

需自备的仪器和用品：

可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、微量玻璃比色皿/96孔板、可调式移液枪、研钵/匀浆器、丙酮、 浓硫酸、无水乙醇和蒸馏水。

操作步骤：

一、样品处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）

1. 取约0.1g样本，加入1mL提取液一，室温快速匀浆，95℃水浴20min，冷却至室温，4000g 25℃离心10min，弃上清。沉淀加入1.5mL提取液一和丙酮交替各洗2遍（涡旋振荡2min左右，4000g 25℃离心10min，弃上清即可）， 沉淀即为粗细胞壁，加入1mL提取液二（去除淀粉）浸泡15小时，4000g 25℃离心10min，弃上清，加入1mL提取 液三，充分匀浆。8000g 4℃离心10min，取上清液待测。

二、测定操作

1. 分光光度计/酶标仪预热30min以上，调节波长至530nm，分光光度计蒸馏水调零。

2. 将50μmol/mL标准液用提取液三稀释为2、1、0.8、0.6、0.4、0.2、0.1μmol/mL的标准溶液备用。

3. 操作表：

三、离子结合型果胶含量的计算

1. 标准曲线的绘制：

以各个标准溶液的浓度为x轴，其对应的ΔA标准为y轴，绘制标准曲线，得到标准方程y=kx+b，将ΔA测定带 入方程得到x（μmol/mL）。

2. 离子结合型果胶含量的计算：

离子结合型果胶含量(μmol/g质量)=x×V提取液三÷W =x÷W

 V提取液三：加入提取液三的体积，1mL；W：样本质量，g。

注意事项：

1. 浓硫酸具有强腐蚀性，操作时需特别注意，90℃加热取出后冷却再打开盖子，以防液体飞溅烧伤。建议每次实验冷却时间保持一致。

2. 如果测定吸光值超过线性范围吸光值，可以增加样本量或者稀释样本后再进行测定。

原创作者：上海尚宝生物科技有限公司