二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶（Rubisco）活性检测试剂盒

（紫外分光光度法）

注意：正式测定务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定。

产品货号：BA1091

产品规格：25管/24样

产品简介：

1,5-二磷酸核酮糖羧化/加氧酶（Rubisco, EC 4.1.1.39）是植物光合作用中的一个关键酶，既控制着CO₂的固定，同时又制约着碳素向Calvin循环和光呼吸循环分流，其活性的大小直接影响着光合速率。

（1）在 Rubisco 的催化下，1分子的核酮糖-1，5-二磷酸（RuBP）与1分子的CO₂结合，产生2分子的3-磷酸甘油酸（PGA）；（2）PGA 可通过外加的3-磷酸甘油酸激酶和甘油醛-3-磷酸脱氢酶的作用，产生甘油醛-3-磷酸，伴随着NADH氧化生成 NAD⁺；（3）在340 nm NADH 有特征吸收峰， 而NAD⁺没有此吸收峰，因此测定340nm 吸光度下降速率可以代表Rubisco的羧化酶活性。

产品内容：

提取液：液体25mL×1瓶，4℃保存；

试剂一：液体25mL×1瓶，4℃保存；

试剂二：粉剂×1瓶，-20℃保存；

试剂三：粉剂×1支，-20℃保存；临用加入1mL蒸馏水充分溶解待用；

试剂四：粉剂×1支，-20℃保存；临用加入1mL蒸馏水充分溶解待用。

需自备的仪器和用品：

紫外分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水。

操作步骤：

一、粗酶液提取

1、细菌或细胞样品的制备：收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照每500万细菌或细胞加入1mL提取液，超声波破碎细菌或细胞（功率20％，超声3s，间隔10s，重复30次）；10000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

2、称取约0.1g组织加入1mL提取液，冰浴中匀浆。10000g，4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

建议选取新鲜的植物样本。

二、测定步骤：

1、紫外分光光度计预热30min以上，调节波长至340nm，蒸馏水调零。

2、工作液的配制：临用在试剂二中加入全部试剂一，充分混匀，在25℃孵育5min。

3、按下表步骤加样：

三、Rubisco 活性计算：

1、按样本蛋白浓度计算

单位的定义：25℃中每毫克蛋白每分钟氧化1 nmolNADH为一个酶活力单位。

Rubisco 活力（U/mg prot）=[ΔA×V反总÷（ε×d）×10⁹]÷(Cpr×V样) ÷T =344×ΔA÷Cpr

此法需要测定粗酶液中蛋白质浓度，建议选购本公司生产的BCA蛋白质浓度测定试剂盒。

2、按样本鲜重计算

单位的定义：25℃中每g组织1 min氧化1nmolNADH为一个酶活力单位。

Rubisco 活力（U/g 鲜重）=[ΔA×V反总÷（ε×d）×10⁹]÷(V样÷V样总×W) ÷T=344×ΔA÷W

3、按细菌或细胞数量计算

单位的定义：25℃中每1万个细菌或细胞1min氧化1 nmolNADH为一个酶活力单位。

Rubisco 活力（U/10⁴ cell）=[ΔA×V反总÷（ε×d）×10⁹]÷(V样÷V样总×500) ÷T=0.69×ΔA

V反总：反应体系总体积，1.07×10^-3L；ε：NADH摩尔消光系数，6.22×10³L/ mol/cm；d：比色皿光径，1cm；V样：加入样本体积，0.1 mL；V样总：加入提取液体积，1 mL；T：反应时间，5min；W：样品质量，g；500：细胞或细菌总数，500万。

 二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶（Rubisco）活性检测试剂盒

（紫外分光光度法）

注意：正式测定务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定。

产品货号：BA1091

产品规格：25管/24样

产品简介：

1,5-二磷酸核酮糖羧化/加氧酶（Rubisco, EC 4.1.1.39）是植物光合作用中的一个关键酶，既控制着CO₂的固定，同时又制约着碳素向Calvin循环和光呼吸循环分流，其活性的大小直接影响着光合速率。

（1）在 Rubisco 的催化下，1分子的核酮糖-1，5-二磷酸（RuBP）与1分子的CO₂结合，产生2分子的3-磷酸甘油酸（PGA）；（2）PGA 可通过外加的3-磷酸甘油酸激酶和甘油醛-3-磷酸脱氢酶的作用，产生甘油醛-3-磷酸，伴随着NADH氧化生成 NAD⁺；（3）在340 nm NADH 有特征吸收峰， 而NAD⁺没有此吸收峰，因此测定340nm 吸光度下降速率可以代表Rubisco的羧化酶活性。

产品内容：

提取液：液体25mL×1瓶，4℃保存；

试剂一：液体25mL×1瓶，4℃保存；

试剂二：粉剂×1瓶，-20℃保存；

试剂三：粉剂×1支，-20℃保存；临用加入1mL蒸馏水充分溶解待用；

试剂四：粉剂×1支，-20℃保存；临用加入1mL蒸馏水充分溶解待用。

需自备的仪器和用品：

紫外分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水。

操作步骤：

一、粗酶液提取

1、细菌或细胞样品的制备：收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照每500万细菌或细胞加入1mL提取液，超声波破碎细菌或细胞（功率20％，超声3s，间隔10s，重复30次）；10000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

2、称取约0.1g组织加入1mL提取液，冰浴中匀浆。10000g，4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

建议选取新鲜的植物样本。

二、测定步骤：

1、紫外分光光度计预热30min以上，调节波长至340nm，蒸馏水调零。

2、工作液的配制：临用在试剂二中加入全部试剂一，充分混匀，在25℃孵育5min。

3、按下表步骤加样：

三、Rubisco 活性计算：

1、按样本蛋白浓度计算

单位的定义：25℃中每毫克蛋白每分钟氧化1 nmolNADH为一个酶活力单位。

Rubisco 活力（U/mg prot）=[ΔA×V反总÷（ε×d）×10⁹]÷(Cpr×V样) ÷T =344×ΔA÷Cpr

此法需要测定粗酶液中蛋白质浓度，建议选购本公司生产的BCA蛋白质浓度测定试剂盒。

2、按样本鲜重计算

单位的定义：25℃中每g组织1 min氧化1nmolNADH为一个酶活力单位。

Rubisco 活力（U/g 鲜重）=[ΔA×V反总÷（ε×d）×10⁹]÷(V样÷V样总×W) ÷T=344×ΔA÷W

3、按细菌或细胞数量计算

单位的定义：25℃中每1万个细菌或细胞1min氧化1 nmolNADH为一个酶活力单位。

Rubisco 活力（U/10⁴ cell）=[ΔA×V反总÷（ε×d）×10⁹]÷(V样÷V样总×500) ÷T=0.69×ΔA

V反总：反应体系总体积，1.07×10^-3L；ε：NADH摩尔消光系数，6.22×10³L/ mol/cm；d：比色皿光径，1cm；V样：加入样本体积，0.1 mL；V样总：加入提取液体积，1 mL；T：反应时间，5min；W：样品质量，g；500：细胞或细菌总数，500万。

原创作者：上海尚宝生物科技有限公司