您好,欢迎来到易推广 请登录 免费注册

  • 高级会员服务
  • |
  • 广告位服务
  • |
  • 设为首页
  • |
  • 收藏本站
  • |
  • 企业档案

    • 会员类型:初级版会员
    • 易推广初级版会员:4
    • 工商认证【已认证】
    • 最后认证时间:
    • 注册号: 【已认证】
    • 法人代表: 【已认证】
    • 企业类型:生产商 【已认证】
    • 注册资金:人民币万 【已认证】
    • 产品数:7710

上海尚宝生物科技有限公司 主营产品:生物专业领域内的技术研究,健身器材,日用百货,生物实验仪器

易推广认证请放心拨打

13671551480

当前位置:易推广>上海尚宝生物科技有限公司>技术文章>Annexin V PE/7-AAD 凋亡检测试剂盒

企业档案

会员类型:初级版会员

已获得易推广信誉   等级评定
10成长值

(0 -40)基础信誉积累,可浏览访问

(41-90)良好信誉积累,可接洽商谈

(91+  )优质信誉积累,可持续信赖

易推广初级版会员:4

工商认证 【已认证】

最后认证时间:

注册号: 【已认证】

法人代表: 【已认证】

企业类型:生产商 【已认证】

注册资金:人民币万 【已认证】

产品数:7710

参观次数:907905

手机网站:http://m.yituig.com/c158049/

商铺地址:http://http://www.saint-bio.com/

技术文章

Annexin V PE/7-AAD 凋亡检测试剂盒

点击次数:14 发布时间:2023/11/20 11:12:43

Annexin V PE/7-AAD 凋亡检测试剂盒

产品货号: BA1984

 

产品规格: 20T/50T/100T

 

产品简介

细胞凋亡早期改变发生在细胞膜表面,这些细胞膜表面的改变是磷脂酰丝氨酸(PS)从细胞膜内转移到细胞膜外,使PS暴露在细胞膜外表面。PS是一种带负电荷的磷脂,正常主要存在于细胞膜的内面在细胞发生凋亡时细胞膜上的这种磷脂分布的不对称性被破坏而使PS暴露在细胞膜外。Annexin V具有易于结合到磷脂类如PS 的特性,对PS有高度的亲和性。因此,该蛋白可充当一敏感的探针检测暴露在细胞膜表面的PSPS转移到细胞膜外不是凋亡所独特的,也可发生在细胞坏死中。两种细胞死亡方式间的差别是在凋亡的初始阶段细胞膜是完好的,而细胞坏死在其早期阶段细胞膜的完整性就破坏了。因此,可以采用AnnexinV7-AAD双染的方法,通过流式检测细胞早期凋亡。

 

产品组成:

产品名称

20T

50T

100T

保存条件

4× (Binding Buffer 4×)

4ml

10ml

20ml

2-8

7-AAD Viability Staining Solution

0.2ml

0.5ml

1.0ml

2-8

rhAnnexin V/PE

0.1ml

0.25ml

0.5ml

2-8

 

操作步骤(仅供参考):

1. 细胞样品的准备:

a) 对于贴壁细胞:小心收集细胞培养液到一离心管内备用。用不含EDTA的胰酶消化细胞,至细胞可以被轻轻用移液管或枪头吹打下来时,加入面收集的细胞培养液,吹打下所有的贴壁细胞,并轻轻吹散细胞。再次收集到离心管内。1000rpm左右离心5min,沉淀细胞。对于特定的细胞,如果细胞无法离心至离心管底可以适当延长离心时间或稍稍加大离心力。小心吸除上清,可以残留约50µl左右的培养液,以避免吸走细胞。加入约1ml 4℃预冷的PBS,重悬细胞,再次离心沉淀细胞,小心吸除上清;

b) 对于悬浮细胞:1000rpm左右离心5min,沉淀细胞。对于特定的细胞,如果细胞无法离心管底,可以适当延长离心时间或稍稍加大离心力。小心吸除上清,可以残留约50µl左右的培养液,以避免吸走细胞。加入约1ml 4℃预冷的PBS,重悬细胞,再次离心沉淀细胞,小心吸除上清;

2. 用去离子水按1:3稀释结合缓冲液(4ml 4×结合缓冲液+12ml去离子水)

3. 1×结合缓冲液重新悬浮细胞,调节其浓度为1-5×106 /ml

4. 100µl的细胞悬液于5ml流式管中,加入5µl Annexin V/PE混匀后于室温避光孵育5分钟;

5. 加入10µl 20ug/ml7AAD,并加400µl PBS,立刻进行流式检测。

 

实验设计:

1)未转染细胞

空白管:阴性对照组细胞,不加Annexin V/PE7AAD,用于调节电压。

单染管:阳性对照组细胞,只加Annexin V/PE或只加7AAD,用于调节补偿。

检测管:处理的细胞,加Annexin V/PE7AAD。用空白管和单染管调节好电压补偿后,获得所需要的流式数据。 2)转染GFP

未转染空白管:未转染细胞,不加Annexin V/PE7AAD,用于调节电压。

未转染单染管:未转染且有明显凋亡的细胞,只加Annexin V/PE或只加7AAD,用于调节补偿。

转染GFP空白管:转染GFP对照组细胞,不加Annexin V/PE7AAD,用于调节补偿。

检测管:处理的细胞,加Annexin V/PE7AAD。调节好电压补偿后,获得所需要的流式数据

 

注意事项:

1. Annexin V是与磷脂酰丝氨酸(PS)亲和,而PS在不同种属间没差异。在正常细胞中,PS只分布在细胞膜脂质双层的内侧,而在细胞凋亡早期,PS由脂膜内侧翻向外侧。

2. 低浓度胰酶消化,轻柔吹打贴壁细胞23次,离心机41000rpm 5min离心,处理得当的话,胰酶造成损伤可以控制在5%以内,有对照组的情况下对实验结果不会造成明显影响。

3. 先加PI不仅染色是否每组都均匀充分很难判断,而且PI本身对细胞也是有毒性的,对实验结果影响会比胰酶大,不建议这样做。

4. Annexin VCa依赖的蛋白,所以不能加入EDTA,防止EDTA螯合了Ca离子从而影响Annexin V,进而影响结果。

5. 用流式检测凋亡时,7AAD受时间的影响很大,因标记了7AAD后会加大细胞毒性,随着时间延长会导致7AAD的染色增加,特别是检测早期凋亡时,如果时间延长除了会导致在流式细胞仪上的细胞分群差距加大外误差会明显加大。一般7AAD加上后立刻上机,然后在一个小时内检测完成。两种方法都可以,但是按照我们操作步骤造成的误差会更小。

 

保存条件:2-8℃避光,勿冷冻。6个月有效。

 

原创作者:上海尚宝生物科技有限公司

相关产品

中国彩虹热线
在线咨询

提交