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技术文章
茶多酚(TP)检测试剂盒(福林酚比色法)
点击次数:21 发布时间:2024/4/22 10:34:00
产品货号:BA1571
产品规格:50T
产品简介:
茶多酚(Tea Polyphenols,TP)是茶叶中多酚类物质的总称,包括黄烷醇类、花色昔类、黄酮类、黄酮醇类和酚酸类等,是一类儿茶素为主体的黄酮化合物,儿茶素占60~80%,具有C6-C3-C6碳骨架结构,是一种重要的天然抗氧化物质,能够清除自由基。类物质茶多酚又称茶鞣或茶单宁,是形成茶叶色香味的主要成份,也是茶叶中有保健功能的主要成份,研究表明茶多酚等活性物质具解毒和抗辐射作用,能有效地阻止放射性物质侵入骨髓,并可使锶90和钴60迅速排出体外。
茶多酚(TP)检测试剂盒(福林酚比色法)参考国家标准GB/T 8313而来,其检测原理是利用福林酚氧化茶多酚中的酚羟基-OH,使其显蓝色,用分光光度计或酶标仪测定765nm(或600nm)处吸光度,在一定范围内吸光度与颜色深浅的变化成正比,与标准曲线比较,进而计算出茶多酚的含量,主要用于测定植物组织样品中茶多酚含量,尤其适用于茶叶。该试剂盒仅用于科研域,不适用于临床诊断或其他用途。
产品组成:
试剂名称 | 50T | 保存条件 |
试剂(A): 茶多酚标准(1mg/ml) | 2ml | 4℃,避光 |
试剂(B): 福林酚试剂 | 6ml | 4℃,避光 |
试剂(C): TP显色液 | 50ml | 4℃ |
需自备的仪器和用品:
1. 茶叶、绿茶等待测样本、蒸馏水、甲醇
2. 研钵、200目细胞筛、水浴锅或电炉
3. 离心机、离心管或试管、比色皿、分光光度计
操作步骤 (仅供参考) :
1. 准备样品:
(1) 固体样品:称取1g植物样品,充分研磨成粉末,称取0.2g加入10ml离心管中,再向其中加入在70℃水浴中预热的70%甲醇水落液5ml,盖紧并使样品湿润,立即放入70℃水浴中浸提10min(每隔5min晃动1次),浸提后冷却至室温,3500r/min离心10min,转移上清液至10ml容量瓶,向样品残渣再加入5ml 70%甲醇水溶液浸提一次,重复上述操作,合并上清液并定容至10ml,摇匀,即为茶多酚提取液;4℃避光保存,用于茶多酚的检测。
(2) 绿茶、血浆、血清和尿液等液体样品:绿茶样品可直接用该试剂盒测定,血浆、血清按照常规方法制备后可直接用本试剂盒测定。
2. 配制系列茶多酚标准:用蒸馏水和茶多酚标准(1mg/ml),按下表进行操作,依次稀释。
加入物(μl) | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 |
茶多酚标准(1mg/ml) | 5 | 10 | 20 | 40 | 60 | 80 | 100 |
蒸馏水 | 995 | 990 | 980 | 960 | 940 | 920 | 900 |
相当于茶多酚含量(μg/ml) | 5 | 10 | 20 | 40 | 60 | 80 | 100 |
3. 配制福林酚工作液:按照福林酚试剂:蒸馏水=1:9的比例,现配现用,不宜保存。
4. TP加样:取96管板,按照下表设置空白管、对照管、测定管,溶液应按照顺序依次加入,并注意避免产生气泡;如果样品中的TP浓度过高,可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定,样品的检测能设置2平行管,求平均值。
加入物(ml) | 空白管 | 标准管 | 测定管 |
蒸馏水 | 0.5 | - | - |
系列茶多标准(1~7号) | - | 0.5 | - |
待测样品 | - | - | 0.5 |
福林酚工作液 | 1 | 1 | 1 |
摇匀,反应5~8min,加入0.8ml TP显色液,摇匀,室温下放置60min。 |
5. TP测定:以空白管调零,1cm比色皿,分光光度计测定765nm(或600nm)处各标准管、测定管的吸光度。
计算:
以系列茶多酚标准浓度(1~7号)( 5、10、20、40、60、80、100μg/ml)为横坐标,以对应的吸光度为纵坐标,绘制标准曲线,求得回归方程;以测定管吸光度代入回归方程求得提取液中TP含量。
固体样品TP含量(μg/g)= (C×VT×N)/W
式中:C=根据标准曲线求得提取液中茶多酚含量(μg/ml)
VT=提取液的总体积(ml) =10ml
W=固体样品的质量(g) =0.2g
N=提取液的稀释倍数
液体样本TP含量(μg/ml)= C×N
式中:C=根标准曲线求得提取液中茶多酚含量(μg/ml)
N=提取液的稀释倍数
注意事项:
1. 茶多酚提取液宜4℃避光保存,且保存时间在24h以内。
2. 福林酚有一定的腐蚀性,请小心提作。
3. 样品中茶多酚浓度过高,颜色反应将特别深,超出仪器的检测范围,应用蒸馏水适当稀释重新检测。
4. 该试剂盒测定标准品时,肉眼可见,浓度小于10μg/ml时呈浅蓝色,20~60μg/ml时呈蓝色,大于80μg/ml时呈深蓝色。
有效期:6个月有效,4℃运输,4℃保存。
原创作者:上海尚宝生物科技有限公司