乳酸检测试剂盒（乳酸脱氢酶比色法）

产品货号：BA1698

产品规格：50T

产品简介：

乳酸(Lactic acid，LD)又称2-羟基丙酸是一种化合物，是一种含有羟基的羧酸，分子式是C₃H₆O₃，参与生物化学很多反应过程。乳酸检测有化学氧化法、酶催化法、电化学法、酶电感应器法。其中，酶催化法是使用乳酸脱氢酶(LDH)催化乳酸氧化，生成丙酮酸和NADH，通过分光光度法或荧光光度法测定NADH的生成量，进而计算出乳酸含量。

乳酸检测试剂盒(乳酸脱氢酶比色法)其检测原理是在NAD存在条件下，乳酸脱氢酶(LDH)催化乳酸生成丙酮酸，同时生成NADH。在碱性条件下显色剂与丙酮酸生成复合物，并使平衡偏向乳酸氧化为丙酮酸的方向，驱动反应完成，生成的NADH与乳酸为等量摩尔。通过分光光度比色法测定340nm处吸光度，据此通过比色分析就可以计算出LD水平。该试剂盒可用于检测细胞或组织的裂解液或匀浆液、血浆、血清等样品中内源性的乳酸含量。该试剂盒仅用于科研域，不宜用于临床诊断或其他用途。

产品组成：

需自备的仪器和用品：

离心管或小试管、蒸馏水、水浴锅或恒温箱、比色杯、分光光度计。

操作步骤：

1. 准备样品：

血浆、血清、尿液及其他体液样品：血浆、血清按照常规方法制备后可以直接用于本试剂盒的测定，尿液通常也可以直接用于测定，-20℃冻存。

细胞或组织样品：取恰当细胞或组织裂解液，如果有必要需进行适当匀浆，低速离心取上清，-20℃冻存，用于LD的检测。

高浓度样品：如果样品中含有较高浓度的LD，可以使用原有的裂解液或PBS等进行稀释，如鸡血清、血浆可稀释5～10倍后检测。

2. 配制标准品工作液：取乳酸标准(20mmol/L)0.1ml溶解于0.3ml乳酸标准稀释液，使浓度达到5mmol/L，即为标准品工作液-乳酸标准(5mmol/L)。4℃避光保存2个月有效。

3. LD检测：按照下表设置空白管、对照管、标准管、测定管，溶液应按照顺序依次加入，并注意避免产生气

泡。如果样品中的LD浓度过高，可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定。样品的检测能设置平行管。

4. 用分光光度计检测，以蒸馏水调零，比色杯光径1.0cm，读取空白管、对照管、标准管、测定管的340nm吸光度(即A_空白、A_对照、A_标准、A_测定)，一般应数小时内检测完毕。 

计算结果： 

血清、血浆、尿液、脑脊液乳酸(mmol/L)=｛(A_测定−A_对照)/(A_标准−A_空白)｝×5

组织乳酸(mmol/g)=｛(A_测定−A_对照)/(A_标准−A_空白)｝×5/待测样品蛋白浓度(g/L)

式中：A_测定=测定管的吸光度值

A_对照=对照管的吸光度值

A_标准=标准管的吸光度值

A_空白=空白管的吸光度值

参考区间： 

健康成年人安静状态空腹静脉血      0.6～2.2mmol/L

健康成年人安静状态空腹动脉血      0.3～1.47mmol/L

健康成年人尿液乳酸排出量       5.5～22mmol/d

新生儿毛细血管血                  1.2～4.4mmol/L

0～16 儿童脑脊液                  1.1～2.8mmol/L

注意事项：

1. 本法适用于自动分析仪，分别监测测定管和标准管的吸光度升高速率，计算乳酸的浓度。

2. 如果没有分光光度计，也可以使用酶标仪测定。

3. 抗凝剂用肝素钠-氟化钠较好。抗凝血样品置于冰浴中送检，尽快分离出血浆等。

4. 草酸抗凝剂对LDH有一定的抑制作用。

5. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

有效期：6个月有效。

原创作者：上海尚宝生物科技有限公司