淀粉分支酶（SBE）活性检测试剂盒（可见分光光度法）

产品货号：BA1083

产品规格：50管/24样

产品说明：

SBE（EC 2.4.1.18）主要存在于植物中，是参与支链淀粉合成的关键酶，测定SBE活性在淀粉生物合成、农作物品种选育和品质遗传改良研究中具有重要意义。

淀粉和碘结合后在660nm有特征光吸收，SBE可切断支链淀粉侧支，从而降低了淀粉-碘复合物在660nm吸收值，一定时间内吸光度下降的百分率可以反映SBE活性。

注意：实验之建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者 增加样本量进行检测。

产品内容： 

溶液的配制：

试剂二：临用加入1mL蒸馏水，缓慢加热，逐渐升温至沸腾，使其充分溶解，备用。

技术指标： 

检出限：0.0074mg/mL

线性范围：0.008-0.7mg/mL

注意：实验之建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品： 

可见分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵/匀浆器、冰、蒸馏水。

操作步骤： 

一、样本处理理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）

称取约0.1g组织加入1mL提取液，冰浴中匀浆。15000g，4℃离心15min，取上清，置冰上待测。

二、测定步骤

1. 可见分光光度计预热30min以上，调节波长至660nm，蒸馏水调零。

2. 样本测定：

混匀，室温静置10min，用蒸馏水调零，660nm处读取各管吸光值。

注意：若有样本浑浊，建议离心后取上清测定。

三、SBE活力单位计算

1. 按照蛋白浓度计算

单位的定义：以波长660nm的吸光度下降百分率表示，每mg蛋白在1mL反应体系中每分钟降低1%碘蓝值为一个酶活性单位。

SBE活性(U/mg prot) =（A对照管-A测定管）÷A对照管×100%÷1%÷（Cpr×V样本）×V反应÷T =24×（A对照管-A测定管）÷A对照管÷Cpr

2. 按照样本质量计算

单位的定义：以波长660nm的吸光度下降百分率表示，每g组织在1mL反应体系中每分钟降低1%碘蓝值为一个酶活性单位。

SBE 活性(U/g质量) =（A对照管-A测定管）÷A对照管×100%÷1%÷（W÷V提取×V样本）×V反应÷T =（A对照管-A测定管）÷A对照管÷W×24

V样本：加入样本体积，0.25mL；V提取：加入提取液体积，1mL；Cpr：蛋白浓度，mg/mL；W：样本质量， g；V反应：反应体系体积，1.2mL；T：反应时间，20min。

注意事项：

1. 可以在不同对照管中加入不同的样本，然后集中进行1min沸水浴处理。

2. 试剂一如有沉淀，加入之要使之充分溶解混匀。

原创作者：上海尚宝生物科技有限公司