蛋白质羰基含量检测试剂盒（微量法）

注意：正式测定务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定。

产品货号：BA1074

产品规格：100管/48样

产品简介：

蛋白质羰基是多种氨基酸在蛋白质的氧化修饰过程中的早期标志，其含量高低表明蛋白质氧化损伤程度的大小，是衡量蛋白质氧化损伤的主要指标。

羰基与2,4-二硝基苯肼反应生成红色2,4-二硝基苯腙，在370nm处有特征吸收峰。

产品内容：

提取液：液体50mL×1瓶，4℃保存。

试剂一：粉剂0.1g×5支，4℃保存。（使用根据样品数，每支加1mL水震荡溶解后离心取上清使用，每支为 10个样品用量）

试剂二：液体6mL×1瓶，4℃避光保存。

试剂三：液体6mL×1瓶，4℃保存。

试剂四：液体15mL×1瓶，4℃保存。

试剂五：根据测定样品量，将乙酸乙酯和无水乙醇等体积混合。（自备）

试剂六：液体30mL×1瓶，4℃保存。

需自备的仪器和用品：

天平、恒温水浴锅、低温离心机、漩涡震荡仪、紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔UV板、蒸馏水、无水乙醇和乙酸乙酯。

操作步骤：

一、样品处理

组织样品：称取约0.1g组织样品，加入1mL提取液，充分匀浆后于4℃，5000rpm离心10min，取上清，加入0.1mL试剂一，室温放置10min，4℃，12000rpm离心10min，取上清，然后取20µL测定蛋白含量，剩余的作为待测样品。

二、测定步骤和操作表

1、分光光度计预热30min以上，调节波长至370nm，试剂六调零。

2、 操作表

三、计算公式

a) 用微量石英比色皿测定的计算公式如下

1、按蛋白浓度计算：

蛋白质羰基含量（µmol/mg prot）=（OD_370测定管－OD_370空白管）÷（ε×d）×V÷(Cpr×V样品)

=（OD_370测定管－OD_370空白管）÷4.4÷Cpr

2、按样本鲜重计算：

蛋白质羰基含量（µmol/g 鲜重）=（OD_370测定管－OD_370空白管）÷（ε×d）×V÷(W×V样品÷V提取)

=（OD_370测定管－OD_370空白管）÷4÷W

ε：蛋白质羰基消光系数，22 mL/µmol/cm；d：比色皿光径，1cm；V：加入试剂六体积，0.3mL；V样品：加入样本体积，0.06 mL； V提取：加入提取液及试剂一体积，1.1mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样品质量，g。

b) 用96孔UV板测定的计算公式如下：d：光径，0.6cm。

注意事项：

1、试剂一使用之根据要测定的样品数现配，配置好后4℃保存，若变为黑色，则不能使用。

2、试剂二见光易分解，反应需严格避光。

 蛋白质羰基含量检测试剂盒（微量法）

注意：正式测定务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定。

产品货号：BA1074

产品规格：100管/48样

产品简介：

蛋白质羰基是多种氨基酸在蛋白质的氧化修饰过程中的早期标志，其含量高低表明蛋白质氧化损伤程度的大小，是衡量蛋白质氧化损伤的主要指标。

羰基与2,4-二硝基苯肼反应生成红色2,4-二硝基苯腙，在370nm处有特征吸收峰。

产品内容：

提取液：液体50mL×1瓶，4℃保存。

试剂一：粉剂0.1g×5支，4℃保存。（使用根据样品数，每支加1mL水震荡溶解后离心取上清使用，每支为 10个样品用量）

试剂二：液体6mL×1瓶，4℃避光保存。

试剂三：液体6mL×1瓶，4℃保存。

试剂四：液体15mL×1瓶，4℃保存。

试剂五：根据测定样品量，将乙酸乙酯和无水乙醇等体积混合。（自备）

试剂六：液体30mL×1瓶，4℃保存。

需自备的仪器和用品：

天平、恒温水浴锅、低温离心机、漩涡震荡仪、紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔UV板、蒸馏水、无水乙醇和乙酸乙酯。

操作步骤：

一、样品处理

组织样品：称取约0.1g组织样品，加入1mL提取液，充分匀浆后于4℃，5000rpm离心10min，取上清，加入0.1mL试剂一，室温放置10min，4℃，12000rpm离心10min，取上清，然后取20µL测定蛋白含量，剩余的作为待测样品。

二、测定步骤和操作表

1、分光光度计预热30min以上，调节波长至370nm，试剂六调零。

2、 操作表

三、计算公式

a) 用微量石英比色皿测定的计算公式如下

1、按蛋白浓度计算：

蛋白质羰基含量（µmol/mg prot）=（OD_370测定管－OD_370空白管）÷（ε×d）×V÷(Cpr×V样品)

=（OD_370测定管－OD_370空白管）÷4.4÷Cpr

2、按样本鲜重计算：

蛋白质羰基含量（µmol/g 鲜重）=（OD_370测定管－OD_370空白管）÷（ε×d）×V÷(W×V样品÷V提取)

=（OD_370测定管－OD_370空白管）÷4÷W

ε：蛋白质羰基消光系数，22 mL/µmol/cm；d：比色皿光径，1cm；V：加入试剂六体积，0.3mL；V样品：加入样本体积，0.06 mL； V提取：加入提取液及试剂一体积，1.1mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样品质量，g。

b) 用96孔UV板测定的计算公式如下：d：光径，0.6cm。

注意事项：

1、试剂一使用之根据要测定的样品数现配，配置好后4℃保存，若变为黑色，则不能使用。

2、试剂二见光易分解，反应需严格避光。

原创作者：上海尚宝生物科技有限公司