产品货号：R23004

产品规格：100T

产品简介：

细胞凋亡(Apoptosis)的检测方法有形态学、生物化学、DNA片段化检测方法以及TU NEL等标记片段化DNA方法，但从细胞凋亡概念产生的历史及准确性方面考虑，使用显微镜进行的形态学观察也是很重要的。细胞死亡的检测可以通过荧光色素染色区分活细胞、死细胞，测定细胞代谢活性和形态学观察。这些方法都是利用细胞凋亡这种情况进行测定的，因而不一定反映实际情况， MTT法是测定线粒体中特有酶的活性，反映细胞数目的变化，其结果与细胞死亡的数目未必一致。

Acridine Orange属于三环杂芳香燃料，可以标记DNA、RNA，属于异染性荧光染料，AO常用于细胞内DNA和RNA进行检测，AO与核酸结合方式主要有：1、插入性结合，AO嵌入核酸双链的碱基对之间，这种结合方式主要为AO与DNA的结合，其荧光发射峰为530nm，激发后呈绿色荧光；2、静电吸引，带正电荷的AO与单链核酸的磷酸根(带负电荷)产生静电间的吸引结合，这种结合方式主要为AO与RNA的结合，其荧光发射峰为640nm，激发后呈红色荧光，少量结合会呈桔黄色或桔红色荧光。因此AO嵌合到双链DNA分子中显绿色，与DNA单链或RNA结合时发橙红色荧光；Ethidiu m Bro mide嵌合到双链DNA或RNA的碱基对中，无碱基特异性，发红色荧光；AO可透过活细胞膜，EB不能通过与活细胞膜具有相同通透性的细胞膜。

产品组成：

自备材料：

1. 荧光显微镜

2. PBS

3. 细胞计数板

4. 载玻片、盖玻片

操作步骤(仅供参考)：

1. 收集细胞，用PBS清洗细胞1次，加入适量的PBS重悬细胞，计数并调节细胞浓度至(0.2~5)×10⁶ /ml。

2. 配制AO/EB工作液：取适量的试剂(A)、试剂(B)、试剂(C)，按照试剂(A):试剂(B):试剂(C)=1:1:8的比例稀配制成 AO/EB工作液。

3. 每25~50μ l细胞悬液中加入AO/EB工作液2μ l，混合均匀，试问孵育5~15min。

4. 取洁净载玻片，滴加上5~10μ l细胞悬液，轻轻盖上盖玻片。

5. 在荧光显微镜B域进行观察。

染色结果：

活细胞      绿色荧光

死细胞      橙色荧光

注意事项：

1. 用能通过活细胞膜与DNA结合后发蓝色荧光的Hoechst 33342和只能通过死细胞与DNA结合后发红色荧光的Propidiu m Iodide对细胞进行双染的方法也比较常用。

2. 如有低温离心机进行离心效果更佳。

3. 操作过程中应注意减少试剂(A)、试剂(B)暴露于强光下的时间。

4. EB Solution有一定毒性，请小心操作。

5. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

有效期：6个月有效。4℃运输，4℃保存。

原创作者：上海尚宝生物科技有限公司