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技术文章
总胆固醇(TC)检测试剂盒(邻苯二甲醛比色法)
点击次数:52 发布时间:2022/5/31 11:15:44
总胆固醇(TC)检测试剂盒(邻苯二甲醛比色法)
产品货号: BA1761
产品规格:60T
产品简介:
胆固醇(Cholesterol)又称胆甾醇,是一种环戊烷多氢菲的衍生物,分子式C27H46O。胆固醇广泛存在于动物体内,其中脑、神经组织丰富,在肾、脾、皮肤、肝和胆汁中含量也较高。总胆固醇(TC)检测试剂盒(邻苯二甲醛比色法)检测原理是胆固醇及其脂,在强酸存在下与邻苯二甲醛反应,产生紫红色化合物,该化合物在550nm波长处有吸收峰,分光光度计在550nm处进行比色测定,胆固醇含量在4mg/ml之内与吸光度呈良好线性关系。本试剂盒用于人或动物的血清、血浆、脑脊液、细胞、组织等样本中的总胆固醇含量定量测定。
产品组成:
产品名称 | 60T | 保存条件 |
试剂(A):胆固醇标准(1mg/ml) | 1ml | 4℃ 避光 |
试剂(B):TC assay buffer | 100ml | 室温 |
试剂(C):邻苯二甲醛粉剂 | 2×10mg | 4℃ 避光 |
试剂(D):邻苯二甲醛稀释液 | 30ml | 室温 |
操作步骤(仅供参考):
1. 样本处理:
①血清、血浆、脑脊液样本:从待测样本中分理出的血清或血浆不应有溶血,直接检测,如超过线性范围,用生理盐水稀释后检测。
②细胞样本:
a、取适量的细胞(一般推荐>106以上),离心,弃上清,留取沉淀。
b、用PBS或生理盐水清洗1~2次,离心,弃上清,留取沉淀。
c、加入PBS或生理盐水匀浆,冰浴条件下超声破碎细胞,功率300W,每次3~5s,间隔30s,重复3~5次。
③组织样本:准确称取适量组织样本,按质量(g):生理盐水=的比例,加入生理盐水,冰浴条件下手动或机械匀浆。离心,取上清待用。
2. 配制胆固醇标准工作液:按胆固醇标准(1mg/ml):TC assay buffer的比例准确混合,即为胆固醇标准工作液(0.1mg/ml),然后按下表依次稀释胆固醇标准工作液。
加入试剂(ml)/管号 | 0 | 1 | 2 | 3 | 4 |
胆固醇标准工作液(0.1mg/ml) | 0 | 0.06 | 0.12 | 0.18 | 0.24 |
TC assay bufer | 0.24 | 0.18 | 0.12 | 0.06 | 0 |
总胆固醇浓度(mg/ml) | 0 | 1 | 2 | 3 | 4 |
3. 配制邻苯二甲醛工作液:取1瓶(10mg)邻苯二甲醛粉剂的准确加入邻苯二甲醛稀释液1,充分混匀,即为邻苯二甲醛工作液。4℃避光保存,2周有效。
4. 配制强酸工作液:取适量的TC assay buffer和浓硫酸等量混合,即为强酸工作液。注意:本试剂盒不提供浓硫酸,需用户自备。二者混合时,一定小心操作,以免误伤自己。配制好的强酸工作液工作液中的硫酸含量应准确,否则有可能影响显色效果。
5. 分光光度计胆固醇测定操作:
①按下表依次加入试剂:
加入试剂(ml) | 空白管 | 标准管 | 待测管 |
蒸馏水 | 0.006 |
|
|
系列胆固醇标准工作液 |
| 0.006 |
|
待测血清或其他样本 |
|
| 0.006 |
TC assay buffer | 024 | 0.24 | 0.24 |
邻苯二甲醛工作液 | 0.12 | 0.12 | 0.12 |
强酸工作液 | 2.4 | 2.4 | 2.4 |
②充分混匀, 静置。
③以分光光度计,1cm比色杯测定550m吸光度,以空白管调零,读取标准管和各待测管的吸光度。
计算: 以吸光度为纵坐标,以胆固醇浓度为横坐标,作标准曲线。对照标准曲线即知待测样本的浓度。
注意事项:
1. 上述低温试剂避免反复冻融,以免失效或效率下降。
2. 本法可直接用于检测脑脊液中的TC含量,也可直接检测尿液中的TC含量。
3. 待测样本如不能及时测定,应置于2~8℃保存,3天内稳定。
4. 如果样本TC浓度过高,结果可能呈假性降低,应用生理盐水稀释后重测,结果乘以稀释倍数。
有效期:6个月有效。
原创作者:上海尚宝生物科技有限公司