过氧化氢（H2O2）含量检测试剂盒（硫酸肽法）
产品货号：BA1795 产品规格：50T 产品简介： H2O2是生物体内常见的活性氧分子，也是活性氧相互转化的枢纽，主要由SOD和XOD等催化产生，由CAT和POD等催化降解。H2O2可以直接或间接氧化细胞内核酸、蛋白质等生物大分子，并使细胞膜遭受损害，从而加速细胞的衰老和解体，也是许多氧化应激反应中的关键调节因子。 H2O2与硫酸钛反应生成黄色过氧化-钛复合物沉淀，产物在415 nm处具有特征吸收峰，通过吸光值的变化即可定量检测H2O2的含量。 产品组成： 产品名称 试剂规格 保存条件 使用说明及注意事项试剂一 丙酮100 mL×1瓶（自备试剂） 2-8℃，避光 需4℃预冷后使用试剂二 粉剂×1瓶 2-8℃ 使用加入8 mL浓盐酸充分溶解（40-60℃水浴至完全溶解，需提准备）试剂三 液体15mL×1瓶 2-8℃ - 试剂四 液体70mL×1瓶 2-8℃ - 标准液 液体1mL×1支 2-8℃，避光 1 mmol/mL H2O2标准溶液标准稀释液的制备：将1mmol/mL H2O2标准液使用丙酮（4℃预冷）稀释至1.5、1.0、0.8、0.6、0.4、0.2μmol/mL即为标准稀释液。 需自备试剂：丙酮（CHCOCH3，MW=58.08，CAS: 67-64-1）；浓盐酸（HCl，MW=36.46，CAS: 7647-01-0）序号 A B 1 2 3 4 5 6 稀释浓度（μmol/mL） 1000 100 10 10 10 10 10 10 标准液体积（μL） 100 100 150 100 80 60 40 20 4℃预冷丙酮体积（μL） 900 900 850 900 920 940 960 980 稀释后浓度（μmol/mL） 100 10 1.5 1.0 0.8 0.6 0.4 0.2 测定过程中所需要的仪器和试剂： 可见分光光度计、1mL玻璃比色皿（光径10mm）、研钵/匀浆器、可调式移液器、台式离心机、恒温水浴/ 培养箱、丙酮、浓盐酸和蒸馏水。 操作说明： 1. 样品处理（可根据预实验结果适当调整样本量及比例） ①组织：按照组织质量（g）：试剂一体积（mL）为1：（5-10）的比例（建议称取0.1 g组织，加入1mL试剂一）处理样品，冰浴匀浆，4℃ 8000 g离心10 min，取上清置于冰上待测。 ②细菌或细胞：离心收集细菌或细胞至离心管内，按照细菌或细胞数量（10 4个）：试剂一体积（mL）为（500-1000）：1的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL试剂一）处理样品，冰浴超声破碎（功率20%或200W，超声3s，间隔10s，重复30次），4℃ 8000g离心10 min，取上清置于冰上待测。 ③血清（浆）、培养液等液体样本：按照每100μL液体样本加入900μL试剂一的比例充分混匀，4℃8000g离心10min，取上清置于冰上待测。 2. 测定步骤 ①可见分光光度计预热30 min以上，调节波长至415 nm，蒸馏水调零。 ②试验将试剂二、试剂三和试剂四37℃（哺乳动物）或25℃（其它物种）预热10 min以上。③在离心管中依次加入下列试剂： 试剂 测定管（μL） 标准管（μL） 空白管（μL）待测样本 1000 - - 标准稀释液 - 1000 - 试剂一 - - 1000 试剂二 100 100 100 试剂三 200 200 200 4000g常温离心10min，弃上清，留沉淀 （若样本含有色素，应使用丙酮清洗3-5次去除植物色素） 试剂四 1000 1000 1000 涡旋混匀，室温静置5min使沉淀完全溶解 吸光值测定： 取1mL反应液于1mL玻璃比色皿中，测定415nm处吸光值，记为A测定、A标准和A空白；计算∆A测定=A测定-A空白，∆A标准=A标准-A空白。注：空白管只需测定1-2次。 标准曲线的建立： 以1.5、1.0、0.8、0.6、0.4、0.2μmol/mL为横坐标（x），以其对应的∆A标准为纵坐标（y），绘制标准曲线，得到标准方程y=kx+b，将∆A测定带入公式中得到x（μmol/mL）。 注意事项 1. 丙酮易挥发，4℃预冷后再使用，研磨时必须在冰上进行； 2. 试剂的挥发性较高，建议在通风厨中进行操作，并做好防护措施； 3. 若测定吸光值超出标准吸光值线性范围，建议适当增加样本量或将样本提取液使用丙酮稀释后再进行测定，计算时相应修改即可（可参照预实验结果进行调整）； 4. 为保证结果准确且避免试剂损失，测定请仔细阅读说明书（以实际收到说明书内容为准），确认试剂储存和准备是否充分，操作步骤是否清楚，且务必取2-3个预期差异较大的样本进行预测定，过程中问题请您及时与工作人员联系。