酸性磷酸酶（ACP）检测试剂盒（Folin-酚比色法）
产品货号：BA1702 产品规格：50T/100T 产品简介： 酸性磷酸酶(acid phosphatase，ACP)分布广泛，遍布各种组织，主要存在于细胞的溶酶体内，所以常作为溶酶体标志酶。溶酶体外的酸性磷酸酶存在于内质网和胞质内，各种动物中的酸性磷酸酶各有不同，酸性磷酸酶的适宜pH为4.5～5.5。酸性磷酸酶是一个蛋白家族，哺乳动物中其分子量从18kD到100kD不等，该酶分为两类，一类为酒石酸盐敏感型，一类为氟离子敏感型。溶酶体中的酸性磷酸酶为酒石酸盐敏感型，而红细胞和巨噬细胞中的酸性磷酸酶为氟离子敏感型。 酸性磷酸酶 (ACP)检测试剂盒 (Folin-酚比色法)(Acid Phosphatase Colori metric Assay Kit)检测原理是以磷酸苯二钠作为底物，在酸性条件下，ACP催化底物水解生成苯酚和无机磷，通过Folin-酚(又称福林酚)测定苯酚的生成量，于分光光度计或酶标仪680nm处检测吸光度，以酶促反应时间为横坐标，以产物生成量为纵坐标绘制进程曲线，曲线的起始部分在某一段时间内呈直线，其斜率代表酶促反应的初速度，随着反应时间延长曲线斜率不断下降，因此测定ACP酶活力应该在进程曲线的初速度时间范围内进行，该试剂盒主要用于组织的裂解液或匀浆液、血浆、血清、尿液等样品中内源性的酸性磷酸酯酶活性。该试剂盒仅用于科研域，不宜用于临床诊断或其他用途。 产品组成： 产品名称 50T 100T 保存条件试剂(A): Phenol(10mM) 1ml 1ml 4℃，避光试剂(B): 样品稀释液 50ml 100ml 4℃试剂(C): ACP Assay buffer 0.6ml 1.2ml 4℃，避光试剂(D): ACP终止液 125ml 250ml 室温试剂(E): Folin-酚显色液 4.5ml 9ml 4℃，避光自备材料： 1. 蒸馏水 2. 离心管或试管 3. 水浴锅或恒温箱 4. 比色杯或96孔板 5. 分光光度计或酶标仪 操作步骤（仅供参考）： 1. 准备样品： ①血浆、血清和尿液样品：血浆、血清按照常规方法制备后可以直接用于本试剂盒的测定，尿液通常也可以直接用于测定，-20℃冻存，用于ACP的检测。 ②细胞或组织样品：取恰当细胞或组织裂解液，如果有必要可用PBS或NS进行适当匀浆，一般细胞数量在10以上，组织应在100mg以上，3000 ~ 4000g离心取上清，-20℃冻存，用于ACP的检测。 ③植物样品：取适量的组织加入NS或PBS，充分捣碎或研磨，静置30min，用纱布或滤纸过滤，4000g离心20min，取上清液并测量体积，-20℃冻存，用于ACP的检测。 ④高活性样品：可以使用样品稀释液、PBS或NS稀释含有较高活性的样品后再行检测。2. 配制ACP Assay工作液：取ACP Assay buffer温浴溶解，按ACP assay buffer：样品稀释液=1：19的比例混合，即为ACP Assay工作液。 3. 配制Folin-酚显色工作液：按Folin-酚显色液：蒸馏水=1：2的比例混合即成。 4. 稀释标准品：按Phenol(10mM)：样品稀释液= 1：24的比例配制标准工作液，即Phenol(0.4 mM)，按下表梯度稀释。 加入物(μl) 1 2 3 4 5 Phenol(0.4mM) 50 100 150 200 250 样品稀释液 450 400 350 300 250 Phenol浓度(mM) 0.04 0.08 0.12 0.16 0.2 5. ACP加样：按照下表设置空白管、标准管、测定管、对照管(选做)，溶液应按照顺序依次加入，并注意避免产生气泡。如果样品中的酸性磷酸酯酶活性过高，可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定，样品的检测好能设置2平行管，求平均值。 空白管 标准管 测定管 对照管0.5 - - - - 0.5 - - - - 0.25 0.25 - - 0.25 - 空白管和标准管直接进行下边操作 ACP终止液 2.5 2.5 2.5 2.5 Folin-酚显色工作液 0.25 0.25 0.25 0.25 待测样品 - - - 0.25 摇匀，35℃保温显色10min以上。 6. ACP测定：以空白管(或对照管)调零，比色杯光径1cm，分光光度计测定680nm处标准管和测定管的吸光度(记为A标准和A测定)。 计算： ACP活性单位的定义：在该实验条件下，每分钟每ml酶液产生1μmol酚(nmol/ ml·min) 所需的酶量为一个活性单位。以各标准管的吸光度为纵坐标，相应的酚含量为横坐标绘制酚含量-吸光度值曲线，即为标准曲线。根据测得的各待测样品的吸光度，于标准曲线上查出相应的酚含量，乘以稀释倍数后，换算为“nmol/ml·min”的活性单位。 组织或植物粗酶液获得率(ml) =上清液体积( ml)/组织或植物质量×100 % 注意事项： 1. 待测样品中不能含有磷酸酶抑制剂，同时需避免反复冻融。 2. 建议每次测定时都做标准曲线，以使标准更准确，另外标准品需避免反复冻融。3. 如果没有分光光度计，也可以使用普通的酶标仪测定，但应注意96孔板的大检测体积；虽然酶标仪可以检测，但推荐采用分光光度计。 4. 注意单次少测几个样品，以免样品过多导致的时间差异较大。 5. 所测样品的值高于标准曲线的上限，应用样品稀释液、PBS或NS稀释样品后重新测定。6. 待测样品中酸性磷酸酶活性较低时，可适当延长孵育时间至30min。 有效期：6个月有效。常温运输，4℃保存。