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技术文章
DPPH自由基清除率检测试剂盒(比色法)
点击次数:65 发布时间:2023/2/27 14:30:11
产品货号:BA1847
产品规格:50T/100
产品简介:
在生命活动的代谢过程中不断产生各种自由基,而自由基的积累会使机体产生氧化损伤而引起衰老、肿瘤、中风、心肌炎和糖尿病等慢性疾病,在众多自由基中2,2-二苯基-1-苦基苯肼( DPPH)是一种较稳定的自由基,当有自由基清除剂存在时颜色由紫色向黄色转变,吸光度随之变小。
尚宝生物DPPH自由基清除率检测试剂盒(比色法)又称氮自由基清除能力检测试剂盒或氮自由基清除率检测试剂盒,其检测原理是DPPH自由基是一种较稳定的含氮自由基,含一个单电子,溶于乙醇后溶液呈紫色,在517nm下有强吸收,如果有其他物质提供一个电子与此单电子配对,溶液会褪色,褪色程度与接受电子的量呈正比,通过吸光度下降的程度来反应样品的氮自由基清除能力,主要用于检测血清、植物组织、抗氧化类食品、保健品及药品等样本。该试剂盒仅用于科研域,不适用于临床诊断或其他用途。
产品组成:
产品名称 | 50T | 100T | 保存条件 |
试剂(A): 氮自由基提取液 | 50ml | 100ml | 室温 |
试剂(B): DPPH溶液 | 50ml | 100ml | 2-8℃,避光 |
试剂(C): 维生素C | 10mg | 10mg | 2-8℃ |
自备材料:
1. 蒸馏水、无水乙醇
2. 实验材料:植物组织(芹菜、绿豆、玉米等叶片)、血液、组织样本等
3. 研钵或匀浆器或粉碎机或超声破碎机
4. 离心机、离心管
5. 恒温水浴锅、恒温干燥箱
6. 电子天平、30~50目筛
7. 分光光度计、比色皿
操作步骤(仅供参考):
1. 准备样品:
①植物样品:取新鲜植物样本,清洗干净,研钵研碎(粉碎),干燥箱烘干后过筛,称取0.05g样品,加入0.8ml氮自由基提取液,40℃水浴浸提30~60min,10000rpm离心10min,上清液待用,4℃保存备用(亦可参考相关资料提取方法提取)。
②血浆、血清和尿液样品:血浆(用肝素或枸橼酸钠抗凝,不宜使用EDTA抗凝) 4℃ 5000rpm离心10min,取上清液待用;血清或尿液样品可直接测定。
③细胞样品:按每5×106个细胞加入0.8ml氮自由基提取液,超声破碎(功率200W,超声3s,间隔10s,重复30次),10000rpm离心10min,取上清液待用。
④果汁、葡萄酒等样品:按样品:氮自由基提取液=1:9的比例震荡混匀,10000rpm离心10min,上清液待用,4℃保存备用。
⑤高活性样品:如果样品中有效浓度较高,可用提取液进行恰当的稀释。
2. 配制维生素C溶液:将一支10mg维生素C充分溶解于1ml氮自由基提取液中,即成10mg/ml维生素C溶液;可分成0.1ml的小份,-20℃保存。
3. 配制Vc标准工作液:如需测线性关系,建议用氮自由基提取液将10mg/ml维生素C溶液稀释至20、15、10、8、6、4、2μg/ml的Vc标准工作液;如需清除率约为100%的阳性对照,建议选用大于30μg/ml的Vc标准工作液。
4. 分光光度计开机预热30min,调节波长517nm(500~530nm亦可),无水乙醇调零。
5. DPPH加样:按照下表设置空白管、样本测定管、样本对照管、阳性对照管,溶液应按照顺序依次加入,混匀,室温避光静置30min。
加入物(ml) | 空白管 | 样本测定管 | 样本对照管 | 阳性对照管(标准管) |
氮自由基提取液 | 0.2 | - | - | - |
上清液 | - | 0.2 | 0.2 | - |
Vc标准工作液 | - | - | - | 0.2 |
无水乙醇 | 0.9 | 0.9 | 1.8 | 0.9 |
DPPH溶液 | 0.9 | 0.9 | - | 0.9 |
6. OD值测定:将各管溶液依次加入到比色皿中,用分光光度计检测各管吸光度值,依次记为 A0、A1、A2、A3。
计算:
阳性对照·DPPH 清除率(%)= ( A0- A3)/A0×100%
待测样本·DPPH 清除率(%)=[A0-( A1- A2)]/A0×100%
备注:A0=空白管的吸光度值
A1=样本测定管的吸光度值
A2=样本对照管的吸光度值
A3=阳性对照管的吸光度值
注意事项:
1. 正式测定之建议选择2~3个预期差异较大的样本做预实验。
2. 实验材料应尽量新鲜,当天提取当天测定。
3. 不同样本清除DPPH自由基的能力差异很大。
4. 如样本DPPH清除率大于90%,应用提取液稀释;如样本DPPH清除率小于5%,应提高样本用量以提高有效成分浓度。
5. 样品中不宜添加Triton、DTT等可能影响氧化还原反应的成分。
6. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
有效期:6个月有效;4℃运输,4℃保存。
原创作者:上海尚宝生物科技有限公司