ADPG焦磷酸化酶（AGP）活性检测试剂盒（紫外分光光度法）产品货号：BA1035

产品规格：50管/48样

产品说明:

AGP (EC 2.7.7.21)主要存在于植物中，催化葡萄糖-1-磷酸（G-1-P）与ATP反应生成淀粉合成的直接体ADPG，是植物淀粉生物合成的主要限速步骤。

AGP催化的逆向反应生成G-1-P，在反应体系中添加的磷酸己糖变位酶和6-磷酸葡萄糖脱氢酶依次催化生成6- 磷酸葡萄糖酸和NADPH，340nm下测定NADPH增加速率，即可计算AGP活性。

注意：实验之建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

产品内容：

溶液的配制：

试剂二：临用每支加入8mL双蒸水充分溶解备用；用不完的试剂-20℃分装保存；

试剂三：临用加入3mL双蒸水充分溶解备用；用不完的试剂-20℃分装保存；

试剂四：临用每支加入500μL双蒸水充分溶解备用；用不完的试剂-20℃分装保存；

需自备的仪器和用品： 

紫外分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1mL石英比色皿、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。

操作步骤：

一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）

称取约0.1g组织加入1mL提取液，冰浴中匀浆。10000g，4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

二、测定步驟

1. 分光光度计预热30min以上，调节波长至340nm，蒸馏水调零。

2. 在EP管中按顺序加入下列试剂

混匀后立即在340nm波长下记录初始吸光度A1和2min后的吸光度A2，计算ΔA=A2-A1。

三、AGP活性计算

1. 按样本蛋白浓度计算

单位的定义：每mg组织蛋白在反应体系中每分钟催化产生1nmol NADPH定义为一个酶活性单位。

AGP活性（U/mg prot）＝ΔA÷（ε×d）×V反总÷T÷（Cpr×V样本）=380.5×ΔA÷Cpr

（此法需要自行测定粗酶液蛋白质浓度）

2. 按照样本质量计算

单位的定义：每g组织在反应体系中每分钟催化产生1nmol NADPH定义为一个酶活力单位。

AGP活性（U/g 质量）＝ΔA÷（ε×d）×V反总÷T÷（W×V样本÷V提取）=380.5×ΔA÷W

T：反应时间，15min；ε：NADPH消光系数，6.22×10^-3mL/nmol/cm；V反总：反应总体积，0.71mL；d：石英 比色皿光程，1cm；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL；V样本：加入的样本体积，0.02mL；V提取：加入的提取液体积，1mL；W：样本质量，g。

注意事项：

如果一次性测定样本较多，可以将试剂一、二按比例配成混合液1，将试剂一、三、四和五按比例配成混合液2。

原创作者：上海尚宝生物科技有限公司