企业档案
会员类型:初级版会员
已获得易推广信誉 等级评定
(0 -40)基础信誉积累,可浏览访问
(41-90)良好信誉积累,可接洽商谈
(91+ )优质信誉积累,可持续信赖
易推广初级版会员:4年
最后认证时间:
注册号: 【已认证】
法人代表: 【已认证】
企业类型:生产商 【已认证】
注册资金:人民币万 【已认证】
产品数:2236
参观次数:595648
技术文章
α-葡萄糖苷酶(α-GC)活性检测试剂盒(可见分光光度法)说明书
点击次数:49 发布时间:2023/5/12 16:57:30
产品货号:BA1933 产品规格:50T/24S 产品简介: α-GC(EC 3.2.1.20)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,催化水解芳基或烃基与糖基之间的α-糖苷键 生成葡萄糖,不仅与细胞壁的松弛或加固有关,而且与细胞识别和一些信号分子产生密切相关。 α-GC分解对-硝基苯-α-D吡喃葡萄糖苷生成对-硝基苯酚,后者在400nm有zui大吸收峰,通过测定吸光值升高速 率来计算α-GC活性。 注意:实验之建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。 产品组成: 试剂名称 规格 保存条件 提取液 液体50mL×1瓶 2-8℃ 试剂一 粉剂×2瓶 -20℃ 试剂二 液体25mL×1瓶 2-8℃ 试剂三 液体80mL×1瓶 2-8℃ 标准品 液体1mL×1支 2-8℃ 溶液的配制: 1. 试剂一:临用取1瓶加10mL蒸馏水,充分溶解备用;用不完的试剂-20℃保存4周,避免反复冻融。 2. 标准品:5μmol/mL的对硝基苯酚溶液。 需自备的仪器和用品: 可见分光光度计、低温离心机、水浴锅/恒温培养箱、超声破碎仪、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。 操作步骤: 一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献) 1. 细菌或培养细胞的处理:收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照每1000万细菌或细胞加入1mL提取液,超声波破碎细菌或细胞(功率200W,超声3,间隔10,重复30次),15000g,4℃,离心20min,取上清,置冰上待测。 2. 组织的处理:称取约0.2g组织,加入1mL提取液进行冰浴匀浆;15000g,4℃,离心20min,取上清,置冰上待测。 液体样本:直接检测。若溶液有浑浊需离心后取上清进行测定。 二、测定步骤 1. 分光光度计预热30min以上,调节波长至540nm,蒸馏水调零。 2. 标准溶液的稀释:将 5μmol/mL的标准液用蒸馏水稀释成100、50、25、12.5、6.25、0nmol/mL标准溶液待测。 3. 标准液稀释可参考下表。 序号 稀释浓度(nmol/mL) 标准液体积(µL) 蒸馏水体积(µL) 稀释后浓度(nmol/mL) 1 5000 100 400 1000 2 1000 200 1800 100 3 100 1000 1000 50 4 50 1000 1000 25 5 25 1000 1000 12.5 6 12.5 1000 1000 6.25 7 6.25 0 1000 0(空白管) 实验中每个标准管需500µL标准溶液。 4. 加样表: 试剂名称(μL) 测定管 对照管 标准管 试剂一 400 - - 试剂二 500 500 - 样本 100 100 - 充分混匀,放入37℃水浴锅/恒温培养箱中准确反应30min后,立即放入沸水浴中煮沸5min(盖紧,以防止水分散失),流水冷却后充分混匀(以bao证浓度不变) 试剂一 - 400 - 充分混匀,8000g,4℃,离心5min,取上清液待测 上清液 500 500 - 标准液 - - 500 试剂三 1000 1000 1000 充分混匀,室温静置2min后,于400nm处测定吸光值A,分别记为A测定管、A对照管、A标准管、 A空白管。计算ΔA测定=A测定管-A对照管。ΔA标准=A标准管-A空白管。每个测定管需设一个对照管。 标准曲线和空白管只需测1-2次。 三、α-GC活力计算 1. 标准曲线的建立: 根据标准管的浓度(x,nmol/mL)和吸光度(y,ΔA标准),建立标准曲线。根据标准曲线,将ΔA(y,ΔA测定)代入公式计算样本产物浓度x(nmol/mL)。 2. α-GC活力计算 (1)按样本蛋白浓度计算: 单位的定义:每mg组织蛋白在每mL体系中每小时产生1nmol对-硝基苯酚定义为一个酶活力单位。 α-GC活力(U/mg prot)=(x×V反总)÷(V样×Cpr)÷T=20x÷Cpr (2)按样本质量计算: 单位的定义:每g组织在每mL体系中每小时产生1nmol对-硝基苯酚定义为一个酶活力单位。 α-GC活力(U/g 质量)=(x×V反总)÷(W×V样÷V样总)÷T=20x÷W。 (3)按细菌或细胞数量计算: 单位的定义:每1万个细菌或细胞在每mL体系中每小时产生1nmol对-硝基苯酚定义为一个酶活力单位。 α- GC活力(U/104 cell)=(x×V反总)÷(1000×V样÷V样总)÷T=0.02x Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL,蛋白浓度需要另外测定;V反总:反应体系总体积,1mL;V样:加入反应体系中样本体积,0.1mL;V样总:加入提取液体积,1mL;W:样本质量,g;1000:细胞或细菌总数,1000万; T:反应时间,0.5h。 注意事项:提取液中含有使蛋白变性的成分,故按蛋白浓度计算时需要重新提取蛋白进行测定。
原创作者:上海尚宝生物科技有限公司