血液/细胞/组织基因组DNA提取试剂盒（离心柱型）

产品货号：26151

产品简介：

本试剂盒采用可以特异性结合DNA的离心吸附柱和独特的缓冲液系统，提取多种细胞中的基因DNA。离心吸附柱中采用的硅基质材料为本公司特有新型材料，gao效、一吸附DNA，可zui大限度去除杂质蛋白及细胞中其他有机化合物。提取的基因组DNA片段大，纯度高，质量稳定可靠。

使用本试剂盒回收的DNA可适用于各种常规操作，包括酶切、PCR、文库构建、 Southern杂交等实验。

包装清单：

选配试剂：

红细胞裂解液(Red Cell Lysis Buffer)；RNase A（100mg/ml）。

储存条件：

该试剂盒置于室温（15-25℃）干燥条件下，可保存12个月，更长时间的保存可置于2-8℃。2-8℃保存条件下，若溶液产生沉淀，使用应将试剂盒内的溶液在室温放置一段时间，必要时可在37℃水浴中预热10min，以溶解沉淀。

提取得率：

产品特点： 

简单快速：1 h内即可获得超纯的基因组DNA。

广    泛：适用于血液、多种动物细胞和动物组织等。

超    纯：获得的DNA纯度高，可直接用于PCR、酶切、杂交等分子生物学实验。

操作步骤：

使用请先在缓冲液GD和漂洗液PW中加入无水乙醇，加入体积请参照瓶上的标签。

1.  处理材料

a.如提取材料为血液，可直接使用200μl新鲜、冷冻或加入各种抗凝剂的血液，不足200μl可加缓冲液GA补足。

注意：如需处理更大体积血液，如300μl-1ml，应按以下步骤操作：在样品中加入3倍体积红细胞裂解液（例如，300μl血液加入900μl红细胞裂解液），颠倒混匀，室温放置5 min，期间再颠倒混匀几次。10000 rpm（~11,500×g）离心1min（若离心机gao转速不允许，可3000 rpm（~3,400×g）离心5 min），吸去上清，留下白细胞沉淀，加200μl缓冲液GA，振荡至混匀。 （红细胞裂解液本公司另外有售）

b.如果处理血样为禽类、鸟类、两栖类或更低生物的抗凝血液，其红细胞为有核细胞，因此处理量5-20 μl，可加缓冲液GA补足200μl后进行下面的裂解步骤。

c.贴壁培养的细胞应先处理为细胞悬液，然后10,000 rpm（~11,200×g）离心1 min，倒尽上清，加200 μl缓冲液GA，振荡至悬浮。

d.动物组织（脾组织用量应少10 mg）应先打碎处理为细胞悬液，然后10,000rpm（~11,200×g）离心1 min，倒尽上清，加200μl缓冲液GA，振荡至悬浮。

注意：如果需要去除RNA，可加入4μl RNaseA（100mg/ml）溶液（客户自备），振荡15 sec，室温放置5min。

2.  加入20μl Proteinase K溶液，混匀。

a.提取血液基因组时，只需加入Proteinase K混匀，即可继续进行下一步。

b.提取细胞基因组时，只需加入Proteinase K混匀，即可继续进行下一步。

c.提取组织基因组时，加入Proteinase K混匀后，在56℃放置，直至组织溶解，简短离心以去除管盖内壁的水珠，再进行下一步骤。

注意：不同组织裂解时间不同，通常需1-3 h即可完成（鼠尾需要消化过夜）。不会影响后续操作。每小时颠倒混合样品2-3次，用水浴振荡器也可。

3.  加入200μl缓冲液GB，充分颠倒混匀，70℃放置10 min，溶液应变清亮，简短离心以去 除管盖内壁的水珠。

注意：加入缓冲液GB时可能会产生白色沉淀，一般70℃放置时会消失，不会影响后续实验。如溶液未变清亮，说明细胞裂解不彻di，可能导致提取DNA量少和提取出的DNA不纯。当血液体积≤200 μl且没有采用红细胞裂解处理，或是样本储存条件不佳，水浴后颜 色可能为深褐色，注意溶液中没有团块等沉淀。

4.  加人200μl无水乙醇，充分振荡混匀15 sec，此时可能会出现絮状沉淀，简短离心以去除管盖内壁的水珠。

5.  将上一步所得溶液和絮状沉淀都加入一个吸附柱CB3中（吸附柱放入收集管中），12,000rpm(~13,400×g)离心30sec，倒掉废液，将吸附柱CB3放回收集管中。

6.  向吸附柱CB3中加入500 μl缓冲液GD （使用请先检查是否已加入无水乙醇），12,000rpm(~13,400×g)离心30sec，倒掉废液，将吸附柱CB3放入收集管中。

7.  向吸附柱CB3中加入600 μl 漂洗液PW（使用请先检查是否已加入无水乙醇），12,000rpm(~13,400×g)离心30sec，倒掉废液，将吸附柱CB3放入收集管中。

8.  重复操作步骤7。

9.  将吸附柱CB3放回收集管中，12,000 rpm(~13,400×g)离心2 min，倒掉废液。将吸附柱CB3置于室温放置数分钟，以彻di晾干吸附材料中残余的漂洗液。 注意：这一步的目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除，漂洗液中乙醇的残留会影响后续 的酶反应（酶切、PCR等）实验。

10.  将吸附柱CB3转入一个干净的离心管中，向吸附膜的中间部位悬空滴加50-200μl洗脱缓冲液TE，室温放置2-5min，12,000 rpm (~13,400×g)离心2min，将溶液收集到离心管中。

注意：洗脱缓冲液体积不应少于50μl，体积过小影响回收效率。洗脱液的pH值对于洗 脱效率有很大影响。若用ddH2O做洗脱液应保zheng其pH值在7.0-8.5范围内，pH值低于7.0会降低洗脱效率；且DNA产物应保存在-20℃，以防DNA降解。为增加基因组DNA 的得率，可将离心得到的溶液再加入吸附柱CB3中，室温放置2 min，12,000 rpm（~13,400×g）离心2 min。

注意事项 ：

请务必在使用本试剂盒之阅读此注意事项。

1.  shou次使用应按照试剂瓶标签的说明先在缓冲液GD和漂洗液PW中加入无水乙醇。

2.  样品应避免反复冻融，否则会导致提取的DNA片段较小且提取量也下降。

3.  若缓冲液GA或GB中有沉淀，可在37℃水浴中重新溶解，摇匀后使用。

4.  所有离心步骤均为使用台式离心机，室温下离心。

原创作者：上海尚宝生物科技有限公司