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技术文章
血氨含量检测试剂盒(可见分光光度法)使用说明书
点击次数:13 发布时间:2023/12/1 15:35:11
血氨含量检测试剂盒(可见分光光度法)
产品货号:BA1888
产品规格:50管/48样
产品简介:
血氨主要来源是内源性氨和外源性氨。氨在血中保持恒定状态,即血氨的来源和去路保持动态平衡。氨是有毒物质,主要在肝脏进行代谢解毒。当肝功能严重损害时,氨不能被解毒。氨在中枢神经系统聚集,从而导致肝性脑病。
本法根据氨的靛酚蓝反应原理,通过蛋白沉淀剂将血清(浆)中蛋白沉淀后,利用酚-次氯酸盐直接显色法测定血氨,生成的蓝色靛酚和氨的浓度成正比,在630nm处有特殊吸收峰,据此可由吸光值计算出样本中血氨的含量。本试剂盒可测各种动物血清(浆)等样本中血氨的含量,样本禁止溶血。
Blood Ammonia Indophenol Blue (630nm)
技术指标:
zui低检出限:0.0258μmol/mL
线性范围:0.125-3μmol/mL
注意:实验之建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
产品组成:
试剂名称 | 规格 | 保存条件 |
提取液一 | 液体40mL×1瓶 | 2-8℃ |
提取液二 | 液体40mL×1瓶 | 2-8℃ |
试剂一A液 | 液体7mL×1瓶 | 2-8℃ |
试剂一B液 | 液体28mL×1瓶 | 2-8℃ |
试剂二 | 液体35mL×1瓶 | 2-8℃ |
标准品 | 液体1mL×1支 | 2-8℃ |
溶液的配制:
1. 试剂二:临用将A液与B液按照体积比1:4混匀,根据试验所需量现配现用;
2. 标准品:100μmol/mL氮标准液。
需自备的仪器和用品:
可见分光光度计、台式离心机、水浴锅/恒温培养箱、1mL玻璃比色皿、可调式移液枪、蒸馏水、EP管。
适用范围:
本试剂盒可测各种动物血清(浆)等样本中血氨的含量,样本禁止溶血。
操作步骤 (仅供参考) :
一、测定步骤
1. 分光光度计预热30min以上,调节波长至630nm,蒸馏水调零。
2. 标准品的准备:将100µmol/mL的氮标准液用蒸馏水稀释至3、2、1、0.5、0.25、0.125µmol/mL的标准溶液备用。标准溶液稀释可参考下表。
序号 | 稀释浓度(µmol/mL) | 标准液体积(µL) | 蒸馏水体积(µL) | 稀释后浓度(µmol/mL) |
1 | 100 | 100 | 900 | 10 |
2 | 10 | 300 | 700 | 3 |
3 | 10 | 200 | 800 | 2 |
4 | 2 | 500 | 500 | 1 |
5 | 1 | 500 | 500 | 0.5 |
6 | 0.5 | 500 | 500 | 0.25 |
7 | 0.25 | 500 | 500 | 0.125 |
备注:试验中需标准品200µL。
3. 操作表:(在1.5mLEP管中操作)
试剂名称(µL) | 空白管 | 测定管 | 标准管 |
血清(浆) | - | 200 | - |
标准品稀释液 | - | - | 200 |
蒸馏水 | 200 | - | - |
提取液一 | 500 | 500 | 500 |
提取液二 | 500 | 500 | 500 |
充分混匀,3500 rpm离心10 min,取上清待测 | |||
上清液 | 400 | 400 | 400 |
试剂一 | 400 | 400 | 400 |
试剂二 | 400 | 400 | 400 |
取1mL反应液,于1mL玻璃比色皿中测定630nm处吸光值A,分别记为A空白管、A测定管、A标准管。计算ΔA= A测定管-A空白管,ΔA标准= A标准管-A空白管。标准曲线和空白管只需测1-2 次。 |
二、血氨含量计算
1. 标准曲线的绘制:
根据标准管的浓度(x,µmol/mL)和吸光度ΔA标准(y,ΔA标准),建立标准曲线。根据标准曲线,将ΔA(y,ΔA)带入公式计算样本浓度(x,μmol/mL)。
2. 血氨含量的计算:
血氨含量(μmol/mL)= x×V样÷V样= x
V样:加入的样本体积,0.2mL。
注意事项:
1. 同一批检测样本需配1-2个空白管。
2. 如果测定吸光值超过线性范围吸光值,可以增加样本量或者稀释样本后再进行测定。
3. 试剂一配制后尽快使用,若发现变色则不能使用。
4. 所用器材和取血装置均应无氨;采血后应立即测定,不能立即测定2-8℃可保留2h。
原创作者:上海尚宝生物科技有限公司