（增强型 CCK-8）说明书

  增强型 CCK-8 细胞活力测定试剂根据有配方配制，同等用量下的灵敏度为传统 CCK-8 试剂 3~5 倍， 明显高于国内某知名品牌产品。可用于检测细胞活力，可用于细胞增殖和毒性分析，方法简便而准确。

试剂的优点：

1、 结果准确，重现性好，试剂不影响细胞活力，显色产物直接溶解于培养液，直接测定 OD 值即可准确 反应细胞活力。

2、 操作省时简单，试剂即开即用，无需配制；只需步操作，即可测定。

3、 安全性好，不含放射性同位素和有害有机溶剂，使用安全。

4、 灵敏度高，灵敏度高于 MTT、XTT 及 CCK-8 等方法，同等用量下的灵敏度为传统 CCK-8 试剂 3~5 倍。

使用方法：

1、 使用 96 孔板，细胞培养和处理完毕。

2、 迅速加入增强型 CCK-8 试剂，每孔 100μl 培养基中加入 10μl 增强型 CCK-8 试剂。

3、 培养板放回培养箱，37℃孵育 1~4 小时。

4、 于 490nm 处测定 OD 值。 5、 结果分析 将各测试孔的 OD 值减去对照孔或调零孔 OD 值。各平行孔的 OD 值取平均数。 细胞活力% =（加药细胞 OD-空白 OD）/（对照细胞 OD-空白 OD）×100% 6、 若使用 96 孔外的培养板，试剂用量等比例增减。

使用注意事项：

1、 次使用时，建议先做几个孔摸索条件，考察接种细胞的数量和加入 CCK-8 试剂后的培养时间。

2、 加入试剂速度要快，以避免试剂残留和加样速度不所致反应时间不同造成的显色误差。有条件的情 况下，建议采用多通道移液器，可以减少平行孔间的差异。为避免枪头上的残留所带来的加样误差，增强 型 CCK-8 试剂可在加样用培养基稀释混匀。

3、 试剂加入后轻轻振摇培养板，使增强型 CCK-8 试剂与培养基充分混匀。

4、 试剂加入后培养时间根据细胞种类的不同和每孔细胞数量的多少而异。对于贴壁细胞，加入增强型 CCK-8 的培养时间般为 1~4 小时，但在培养 30 分钟左右即可取出肉眼观察显色程度（根据细胞种类而定）。 与贴壁细胞相比，悬浮细胞较难显色。对于悬浮细胞，在加入增强型 CCK-8 培养 1~4 小时后，可先从培养 箱中取出，目测染色程度或用酶标仪测定决定。白细胞较难显色，因此需要较长的增强型 CCK-8 反应时间 或增加细胞数量（10 5个细胞/孔）。若显色困难，可以将培养板放回培养箱，继续培养数小时后再确定。

5、 如果实验中有还原剂，需要检查背景的 OD 值，即在不含细胞的培养基中加入药物，然后加入增强型 CCK-8 试剂在定时间内检测，和不加药物的培养基进行比较（只加增强型 CCK-8 试剂），如果 OD 值明显 偏高，则说明有反应。

6、 若细胞培养时间较长导致培养基颜色或 pH 发生变化，建议更换新鲜培养基后再加入增强型 CCK-8 试 剂。含有酚红的培养基不影响本试剂的使用。

7、 如果样品为高浑浊度的细胞悬液，建议设定 600nm（或 600nm 以上）作为参比波长，扣除参比波长的 OD 值即可。

8、 如果要测定细胞的具体数量，需要先做个标准曲线。

9、 若测得 OD 值过高，可酌减铺板细胞数或增强型 CCK-8 试剂用量。

试剂包装：

100 次：1ml×1 瓶；

500 次：5ml×1 瓶；

3,000 次：5ml×6 瓶；

5,000 次：5ml×10 瓶；

10,000 次：100ml×1 瓶。

贮藏条件：

  增强型 CCK-8 在避光 0~5℃的条件下可存放年，测定效果完全不变。在-20℃的条件下可以贮存更久。 反复冻融会增加背景值，经常使用时请于 0~5℃条件下保存。

本产品仅供科研使用，不做其它用途。