产品特点
人弹性蛋白酶4（ELA4）elisa试剂盒

目的 研究烯酯酰辅酶A水解酶1( ECH1)在小鼠肝癌高,低淋巴转移Hca-F/Hca-P细胞株中的表达及ECH1基因表达下调后对Hca-F细胞增殖和迁移能力的影响.方法 采用免疫荧光方法检测ECH1在小鼠肝癌细胞株中的表达.构建pGPU6/GFP/Neo-shRNA-ECH1表达载体,稳定转染至高淋巴转移Hca- F细胞中干扰ECH1基因的表达,通过CCK8法检测肿瘤细胞的增殖能力,Transwell小室检测肿瘤细胞的迁移能力,并应用流式细胞仪检测肿瘤细胞 的细胞周期情况.结果 ECH1在小鼠肝癌细胞株中主要表达于细胞质,且ECH1在Hca-F细胞的表达强于其在Hca-P细胞的表达.ECH1表达下调后,Hca-F细胞的增 殖能力明显下降.Transwell小室检测穿膜细胞数pGPU6/GFP/Neo-shRNA-ECH1转染Hca-F组(27.07±17.49)较 阴性对照组(72.38±18.83)和Hca-F组(59.06±30.33)明显减少,细胞周期S期pGPU6/GFP/Neo-shRNA- ECH1转染Hca-F组(86.1%)较阴性对照组(75.8%)和Hca-F组(66.2%)停留细胞数明显增多,G1期pGPU6/GFP /Neo-shRNA-ECH1转染Hca-F组(9.4%)较阴性对照组(24.2%)和Hca-F组(30.3%)停留细胞数明显减少.结论 ECH1可能在肿瘤淋巴转移中发挥作用,抑制ECH1的表达可有效降低体外高淋巴转移肿瘤细胞的增殖和迁移能力.

产品用途
人弹性蛋白酶4（ELA4）elisa试剂盒

禾谷镰刀菌(Fusarium graminearum)是小麦赤霉病主要的致病真菌,寄主范围主要是禾谷类作物.镰刀菌侵染会使产量和品质下降,残留的真菌毒素如玉米赤霉烯酮类(Zearale,ZEN)和脱氧雪腐镰刀菌烯醇(Deoxynivallenol,DON)严重危害健康.同时,DON也是重要的致病因子,在小麦的侵染与致病中发挥重要作用.烯酰基辅酶A水合酶(enoyl-CoA hydratase,Ech1)能够降解脂肪酸,是脂肪酸β-氧化的重要过程.但是,在植物病原真菌中了解甚少.为此,我们对禾谷镰刀菌FgEch1进行了研究.采用生物信息学的方法在禾谷镰刀菌基因组中得到一个FgEch1基因.利用Split-marker的方法构建禾谷镰刀菌FgEch1基因敲除载体,通过PEG介导的原生质体转化法获得FgEch1基因敲除突变体?Ech1和回复菌株?Ech1-C.分析FgEch1基因敲除突变体的相关表型变化,阐明FgEch1在禾谷镰刀菌中的功能.突变体具有下列的特征:1)突变体?Ech1对菌落生长没有影响.2)突变体影响短链脂肪酸的利用.在含正丁酸和正己酸的MM培养基上相对生长速率分别下降74.23%,100%,在含肉豆蔻酸,棕榈酸和油酸的MM培养基上的相对生长速率分别下降14.27%,13.12%,8.28%;3)突变体?Ech1影响孢子产量和萌发率.突变体?Ech1相对于野生型菌株产孢量下降了80.19%;分生孢子在6 h和24 h萌发率分别下降56.85%,13.25%;4)突变体对小麦的致病性减弱.小麦穗接种结果发现,突变体的致病能力下降,麦穗接种后病情指数下降86.7%;5)突变体?Ech1对H_2O_2的胁迫敏感性升高.在含有0,1,5,10mM浓度梯度H_2O_2的CM培养基上生长,H_2O_2对菌丝的抑制率分别提高7.533%,8.505%,12.918%;6)突变体?Ech1和野生型菌株PH-1之间对有性生殖无影响.上述结果表明,FgEch1对无性生殖,短链脂肪酸的利用和致病性发挥着重要的作用.

产品功能
人弹性蛋白酶4（ELA4）elisa试剂盒

目的:统计资料显示,恶性肿瘤跃居我国城市居民疾病死因位,国外肿瘤是其次于心血管疾病的第二大致病因素,侵袭、转移是其恶性生物学行为的原因,其中淋巴道转移主要是上皮来源的肿瘤转移的方式,也是肿瘤早期的主要转移方式,但是其作用机制不清楚。我们实验室通过比较小鼠腹水型肝癌高低淋巴道转移细胞株的差异因子,寻找在淋巴道转移中可能发挥作用的蛋白。基因芯片和蛋白组学方法得到大量差异表达的因子,为肿瘤淋巴道转移机制深入研究提供了靶点。我们发现细胞内氯离子通道蛋白1(CLIC1)和烯酰水合酶辅酶1(ECH1)在mRNA和蛋白水平在高淋巴道转移细胞株Hca-F中高表达,可能在肿瘤转移中发挥重要的作用。CLIC1作为膜通道蛋白,具有可溶型和膜结合型两种形式,分布各种组织中,参与重要生理过程。近年报道CLIC1在多种肿瘤中高表达,但是未见关于淋巴道转移方面的报道。ECH1分布于过氧化物酶体,是脂肪酸β氧化过程中加水反应的关键酶,在多种肿瘤中异常表达,但也未见肿瘤淋巴道转移方面的报道。本文主要研究CLIC1和ECH1在小鼠腹水型肝癌高淋巴道转移细胞株Hca-F和低淋巴道转移细胞株Hca-P的细胞定位及蛋白表达差异,为进一步研究奠定基础。 方法:小鼠腹水型肝癌高淋巴道转移株Hca-F和低淋巴道转移株Hca-P作为研究对象,观察细胞免疫荧光和免疫化学染色检测定位情况,并以Westen Blot方法检测蛋白表达情况。 结果: 细胞免疫荧光:CLIC1在Hca-F和Hca-P均有表达,位于细胞浆、细胞膜。但是两株细胞株细胞膜定位差异不是很明显。ECH1在Hca-F和Hca-P中均有表达,位于细胞浆。 细胞免疫化学染色:CLIC1在Hca-F和Hca-P中均有表达,位于细胞浆、细胞膜。染色强度+++;在Hca-P的染色强度++,并且镜下随机选取10个视野,观察细胞膜定位的比率,统计分析结果显示CLIC1在Hca-F和Hca-P中的膜定位表达没有明显差异(P>0.05)。ECH1在Hca-F和Hca-P中均有表达,主要位于细胞浆;Hca-F强度+++,Hca-P强度++。图像分析CLIC1在Hca-F的IOD/area是0.48,在Hca-P的IOD/area是0.42,P<0.05;ECH1在Hca-F的IOD/area是0.324,在Hca-P的IOD/area是0.285,P<0.05。 Wstern Blot:定量软件分析CLIC1、ECH1和β-actin的光密度值(IOD),以CLIC1在Hca-P中的表达相对值为1,在Hca-F中高表达1.6倍,具有统计学意义(P<0.05),同样的方法得到ECH1在Hca-F中表达较Hca-P高1.5倍,具有统计学意义(P<0.05). 结论:CLIC1表达于Hca-F和Hca-P的胞浆和胞膜,两者之间的细胞膜定位没有明显的差异,并且CLIC1在Hca-F中的表达明显高于Hca-P;ECH1表达于Hca-F和Hca-P的胞浆,在Hca-F的表达明显高于Hca-P,与基因水平和蛋白水平的的实验结果一致,更加证明了CLIC1和ECH1在肝癌淋巴道转移中的潜在作用。

公司介绍
人弹性蛋白酶4（ELA4）elisa试剂盒