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改良的DMEM培养基是为小鼠成纤维细胞设计的,现在常用于贴壁细胞的培养。DMEM的氨基酸浓度是MEM的两倍,维生素浓度是MEM的4倍,采用双倍的HCO3-和CO2浓度起到更好的缓冲作用。
DMEM培养基成分分析实验步骤:
1、取清洗干净的500mL大烧杯一个,加入新鲜制备的三蒸水约300mL,加热至15~30℃;
2、将DMEM干粉袋竖立轻弹,使袋中粉下沉,剪开袋口,将干粉倒入500mL的大烧杯中,用超纯水冲洗袋2~3次;
3、放入清洗干净的磁子,在磁力搅拌器充分搅拌,以确保培养基干粉充分溶解;
4、根据配方要求,加入准确称取的NaHCO31.85g,L-谷氨酰胺0.1g,充分摇匀至溶解;
5、加入已经制备好的双抗溶液,使青霉素和链霉素的使用浓度达到100ug/mL;加入培养基总体积约10%的已灭活的小牛血清;
6、用浓度为7.4%的NaHCO3溶液调整溶液的pH值为7.2~7.4,加超纯水定容,并将培养液转入盐水瓶;用一次性滤器过滤上述培养液到灭菌的盐水瓶,封口,4℃保存备用。
DMEM培养基
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