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人血管紧张素1-7(Ang 1-7)ELISA试剂盒@上海新闻
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人血管紧张素1-7(Ang 1-7)ELISA试剂盒@上海新闻操作步骤
1. 标准品的稀释与加样:在酶标包被板上设标准品孔10孔,在第1、第二孔中分别加标
准品100µl,然后在第1、第二孔中加标准品稀释液50µl,混匀;然后从第1孔、第二
孔中各取100µl分别加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50µl,
混匀;然后在第三孔和第四孔中先各取50µl弃掉,再各取50µl分别加到第五、第六孔
中,再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul,混匀;混匀后从第五、第六孔中各
取50µl分别加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50µl,混
匀后从第七、第八孔中分别取50µl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分别加标准
品稀释液50µl,混匀后从第九第十孔中各取50µl弃掉。(稀释后各孔加样量都为50µl,
浓度分别为150pg/mL,100pg/mL,50pg/mL,25pg/mL,12.5pg/mL)。
2. 加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、待测样
品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40µl,然后再加待测样品10µl(样
品zui终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混
匀。
3. 温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4. 配液:将30(48T的20倍)倍浓缩洗涤液用蒸馏水30(48T的20倍)倍稀释后备用。
5. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30后弃去,如此
重复5次,拍干。
6. 加酶:每孔加入酶标试剂50µl,空白孔除外。
7. 温育:操作同3。
8. 洗涤:操作同5。
9. 显色:每孔先加入显色剂A50µl,再加入显色剂B50µl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色
15分钟.
10. 终止:每孔加终止液50µl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
11. 测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。测定应在加终止
液后15分钟以内进行。
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