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大鼠内皮型一氧化氮合成酶(eNOS)ELISA试剂盒@技术文献操作步骤

1. 标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔10孔，在第1、第二孔中分别加标

准品100µl，然后在第1、第二孔中加标准品稀释液50µl，混匀；然后从第1孔、第二

孔中各取100µl分别加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50µl，

混匀；然后在第三孔和第四孔中先各取50µl弃掉，再各取50µl分别加到第五、第六孔

中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul，混匀；混匀后从第五、第六孔中各

取50µl分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50µl，混

匀后从第七、第八孔中分别取50µl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准

品稀释液50µl，混匀后从第九第十孔中各取50µl弃掉。（稀释后各孔加样量都为50µl，

浓度分别为150pg/mL，100pg/mL，50pg/mL，25pg/mL，12.5pg/mL）。

2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样

品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40µl，然后再加待测样品10µl（样

品zui终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混

匀。

3. 温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。

4. 配液：将30（48T的20倍）倍浓缩洗涤液用蒸馏水30（48T的20倍）倍稀释后备用。 

5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30后弃去，如此

重复5次，拍干。

6. 加酶：每孔加入酶标试剂50µl，空白孔除外。

7. 温育：操作同3。

8. 洗涤：操作同5。

9. 显色：每孔先加入显色剂A50µl，再加入显色剂B50µl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色

15分钟.  

10. 终止：每孔加终止液50µl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。

11. 测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。测定应在加终止

液后15分钟以内进行。

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