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兔外周血巨噬原代细胞
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详细内容
参数规格:T25瓶
培养基 | 含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等 |
产品货号 | CM-H043 |
换液频率 | 每2-3天换液一次 |
生长特性 | 贴壁 |
细胞形态 | 上皮细胞样 |
传代特性 | 可传1-2代 |
消化液 | 0.25%胰蛋白酶 |
培养条件 | 气相:空气,95%;CO2,5% |
使用方法
兔外周血巨噬原代细胞培养步骤主要如下:
注意事项
兔外周血巨噬原代细胞实验分离和培养步骤:
1. 小鼠颈椎脱臼处死后,剃除腹胸部的被毛,放入装有75%酒精的烧杯中浸泡5min。
2. 取出小鼠,在无菌环境下打开胸腔,取出心脏组织,注入盛有无菌1×PBS的培养皿中,洗净组织表面的血液。
3. 将清洗干净的心脏组织转入装有75%酒精的培养皿中浸泡15s以杀死大多数的心脏被膜细胞,浸泡完成后立即转入装有无菌1×PBS的培养皿中震荡清洗。
4. 清洗完成后,用剪刀镊子配合除去主动脉弓和心房组织,仅保留心室部分,再次用1×PBS清洗去除心室内的血液。
5. 将清洗干净的心室组织用剪刀减成1mm3大小左右的碎块,之后用PBS清洗若干次后按下述两种方法进行后续操作。
A.贴块法
6. 将清洗好的碎块转入另一培养皿中,用0.25%胰蛋白酶消化液浸泡组织,室温消化3-5min。
7. 消化完成后,添加数毫升FBS终止消化,之后吸弃液体,加PBS清洗组织块1伺次后,用200ul吸头将组织块平均接种于T-25培养瓶的培养面上,之后将培养瓶放置于37℃二氧化碳培养箱中,静置2-4h。
8. 待组织处于略微脱水的状态时,小心添加2ml完全培养基,添加时注意尽量不要将组织块冲起,要使培养基接触所有的组织块。
9. 之后放入培养箱中继续培养,一般2-4天后成纤维细胞会从组织块周围爬出,待爬出的细胞有较多数量时,可将细胞消化下来,去除组织块,转入另一培养瓶中培养。
B.消化法
6. 将清洗好的碎块转入另一离心管中,加入混合消化液(0.08%胰酶+0.06%Ⅱ型胶原酶)37℃水浴消化8min后,吸取上层混悬液弃去。
7. 余下组织加入混合消化液10ml,37℃水浴震荡消化10min;吸取上层悬液至另一离心管中,加入适量FBS终止反应;剩余沉淀物再加消化液消化3-5次,直至组织块完全消化。
8. 按1∶1加入含血清的培养基,中止酶反应,悬液过150目网筛去除较大的组织块。
9. 收集全部中止后的消化液于离心管中,300g,离心10 min,弃去上清,加入培养液重悬细胞后计活细胞数。
10. 调整细胞密度以1× 106个/ml 接种入的T-25培养瓶中,每瓶添加2ml细胞悬液。
11. 培养瓶放置于37℃,5% CO2培养箱中静置40min后,吸弃上清液以去除未贴壁的非成纤维细胞和死细胞,再添加5ml完全培养基继续培养。
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