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上海晶风生物科技有限公司 主营产品:细胞株细胞系,原代细胞,ATCC细胞,DSMZ细胞等免疫组化试剂盒,Elisa试剂盒,大鼠Elisa试剂盒,小鼠Elisa试剂盒,人Elisa试剂盒,犬Elisa试剂盒,鱼Elisa试剂盒,鸡Elisa试剂盒,牛Elisa试剂盒,其他动物类Elisa试剂盒,植物Elisa试剂盒,分子生物学试剂盒

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人微血管周原代细胞

价格:¥电议

品牌名称:$brandModel.Title(进口品牌)型号:YS2078P 原产地:中国大陆 发布时间:2021/11/10 15:16:38更新时间:2023/12/7 8:12:17

产品摘要:人微血管周原代细胞经Cytokeratin-18免疫荧光鉴定,纯度可达90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

产品完善度: 访问次数:151

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详细内容

                     产品特点
参数规格T25瓶
培养基 含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等
产品货号 CM-H043
换液频率 每2-3天换液一次
生长特性 贴壁
细胞形态 上皮细胞样
传代特性 可传1-2代
消化液 0.25%胰蛋白酶
培养条件 气相:空气,95%;CO2,5%

使用方法
人微血管周原代细胞主要如下:

  1、培养皿/瓶用枪头或移液管吸去原培养液;
  2、无菌PBS或无菌生理盐水洗涤3次(按培养体积加入);
  3、加入适量胰酶消化适当时间(一般胰酶为0.25%;9cm/10cm培养皿和25cm培养瓶,一次加入1mL胰酶。消化时间视细胞类型等多种情况综合考虑,一般如果是细胞株,非原代培养,消化1-2分钟足矣);
  4、用枪头吹打数十次(视细胞类型而定。一般细胞株30-50次吧,耗时一般2分钟左右);
  5、加入适量体积完全培养基终止胰酶消化(如果是9cm/10cm培养皿和25cm培养瓶,可以加入1mL完全培养基;现在培养瓶(皿)里有2mL溶液)。
  6、现在可以将溶液进行分瓶(2mL)。如果是细胞株,直接均分到两个培养瓶(皿)里。如果是原代培养,可以根据消化时间来对细胞进行分离;因此可以将溶液(2mL)都转入新的培养瓶(皿)。
  7、将两个培养瓶(皿)补足完全培养基到正常体积(果是9cm/10cm培养皿和25cm培养瓶,为5mL完全培养液)
  8、镜下观察。刚刚传代细胞还没贴壁,悬浮在溶液中,呈圆形。一般2h之内会贴壁,如果已经贴壁,根据细胞类型有不同的形态,但通常都不是圆形。
  9、镜下观察无误之后,再放入细胞培养箱。培养瓶(皿)放入之,可以用消毒酒精先擦一下。
  10、人胚肾细胞293T传代之后,第二天细胞换液一次。当然,也可以视情况而定。

产品相册

人微血管周原代细胞注意事项
1. 小鼠颈椎脱臼处死后,剃除腹胸部的被毛,放入装有75%酒精的烧杯中浸泡5min。

       2. 取出小鼠,在无菌环境下打开胸腔,取出心脏组织,注入盛有无菌1×PBS的培养皿中,洗净组织表面的血液。

       3. 将清洗干净的心脏组织转入装有75%酒精的培养皿中浸泡15s以杀死大多数的心脏被膜细胞,浸泡完成后立即转入装有无菌1×PBS的培养皿中震荡清洗。

       4. 清洗完成后,用剪刀镊子配合除去主动脉弓和心房组织,仅保留心室部分,再次用1×PBS清洗去除心室内的血液。

       5. 将清洗干净的心室组织用剪刀减成1mm3大小左右的碎块,之后用PBS清洗若干次后按下述两种方法进行后续操作。

       A.贴块法

       6. 将清洗好的碎块转入另一培养皿中,用0.25%胰蛋白酶消化液浸泡组织,室温消化3-5min。

       7. 消化完成后,添加数毫升FBS终止消化,之后吸弃液体,加PBS清洗组织块1伺次后,用200ul吸头将组织块平均接种于T-25培养瓶的培养面上,之后将培养瓶放置于37℃二氧化碳培养箱中,静置2-4h。

       8. 待组织处于略微脱水的状态时,小心添加2ml完全培养基,添加时注意尽量不要将组织块冲起,要使培养基接触所有的组织块。

       9. 之后放入培养箱中继续培养,一般2-4天后成纤维细胞会从组织块周围爬出,待爬出的细胞有较多数量时,可将细胞消化下来,去除组织块,转入另一培养瓶中培养。

       B.消化法

       6. 将清洗好的碎块转入另一离心管中,加入混合消化液(0.08%胰酶+0.06%Ⅱ型胶原酶)37℃水浴消化8min后,吸取上层混悬液弃去。

       7. 余下组织加入混合消化液10ml,37℃水浴震荡消化10min;吸取上层悬液至另一离心管中,加入适量FBS终止反应;剩余沉淀物再加消化液消化3-5次,直至组织块完全消化。

       8. 按1∶1加入含血清的培养基,中止酶反应,悬液过150目网筛去除较大的组织块。

       9. 收集全部中止后的消化液于离心管中,300g,离心10 min,弃去上清,加入培养液重悬细胞后计活细胞数。

      10. 调整细胞密度以1× 106个/ml 接种入的T-25培养瓶中,每瓶添加2ml细胞悬液。

      11. 培养瓶放置于37℃,5% CO2培养箱中静置40min后,吸弃上清液以去除未贴壁的非成纤维细胞和死细胞,再添加5ml完全培养基继续培养。

      售后服务

       除了上述的细胞分离方法以外,还有很多关于其他细胞的分离方法,想要学习的小伙伴可以进行现场学习,如果想要其他原代分离培养方法,可在购买相应的人微血管周原代细胞

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