1－在生物指示剂标签上注明灭菌器锅号, 负荷数量, 灭菌日期; 不要在指示剂的瓶或盖上另贴个标签。将生物指示剂放于个标准测试包内，并置于难灭菌的位置。

2- 将含有生物指示剂的测试包放在灭菌器难灭菌的位置，通常是灭菌器底层，近门或排气口上面。

3- 正常装载。

4－灭菌循环完毕, 取出生物指示剂。

5- 灭菌结束后，从灭菌器内取出含有生物指示剂的测试包，打开散热5分钟后才能取出生物指示剂。同时在压碎安瓿之，让生物指示剂在培养锅外再冷却10分钟后才能压碎，然后进行生物培养。

6－检查生物指示剂标签上的化学指示剂，颜色由玫瑰色变成棕色证明生物指示剂经过压力蒸汽灭菌过程的处理。该颜色的变化并非表明该处理达到灭菌的目的，如果化学指示剂没有变化，请检查灭菌过程。

7－戴上防护眼镜，挤碎安瓿，然后培养生物指示剂。详细步骤请参阅3M ATTEST 290 培养锅操作说明。

8－每次培养须同时培养个未灭菌过的生物指示剂进行阳性对照，阳性对照生物指示剂与经过灭菌处理的生物指示剂为相同生产日期和批号。

阳性对照的目的是保证：1）－正确的培养条件

2）－指示剂的活性（不适当的贮存条件可能影响有效期内的指示剂活性）

3）－3M ATTEST 290 培养锅功能完好

9－在3M ATTEST 290 培养锅（培养温度62+/-20C）内，培养阳性对照和已处理的指示剂3小时，读出终结果。阳性对照必须得出荧光阳性结果（阅读器显示为红灯或+），如阳性对照读出荧光阴性（绿灯或-），应检查培养锅温度和操作过程，直至阳性对照为阳性结果，生物监测的结果才是有效的。对于经过灭菌处理的指示剂，荧光阳性（红灯或+）表明灭菌过程失败，荧光阴性（绿灯或-）表明灭菌过程合格。

10－如果需要通过颜色变化检测生物监测结果，应将生物指示剂放在培养锅内继续培养。同时随时监测阳性结果的出现，如8、12、24，直至168小时（7天），终视觉效果应在168小时（7天）得出。黄色表明细菌生长，灭菌过程失败。168小时（7天）没有颜色变化（培养基为紫色）表明灭菌过程合格。

11－对任何为阳性生物监测结果应立即采取行动，如追回同锅次的灭菌物，和寻找原因。直至生物指示剂的结果呈阴性。

冷却之压碎或过度处理生物指示剂可能导致玻璃安瓿的破碎, 飞溅的碎屑会使人员受伤; 因此建议在从灭菌器内取出生物指示剂时戴防护眼镜和手套, 在压碎生物指示剂时也需要戴防护眼镜。

禁忌：该生物指示剂不能用于121℃预空和132℃下排气压力蒸汽灭菌锅，及干热、化学蒸汽、环氧乙烷和其他的低温灭菌过程的生物监测。