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技术文章
上海通蔚生物ELISA试剂盒的组成结构及检测条件
点击次数：39 发布时间：2023/10/9 23:07:52
ELISA 即酶联免疫吸附测定，是一类常用的免疫酶技术。主要方法是将已知的抗原或抗体吸附在固相载体表面，然后利用酶标记（偶联）的抗体或抗原与之孵育，加入显色剂显色，通过酶标仪测定待测物颜色与标准物颜色的差异，绘制出酶活曲线得出待测物浓度。
ELISA试剂盒组成结构：
1、血清：操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。收集血液后，1000×g离心10分钟将血红细胞迅速小心地分离。
2、血浆：EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000×g离心30分钟去除颗粒。
3、细胞上清液：1000×g离心10分钟去除颗粒和聚合物。
4、组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。1000×g离心10分钟，取上清液。
5、保存：如果样品不立即使用，应将其分成小部分-70℃保存，避免反复冷冻。尽可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量颗粒，检测先离心或过滤。不要在37℃或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
检测elisa试剂盒结果必要条件可分为三个：
1、ELISA加样步骤
在ELISA中一般有3次加样步聚，即加标本，加酶结合物，加底物。冻结血清融解后，蛋白质局部浓缩，分布不均，应充分混匀宜轻缓，避免气泡,可上下倒置混和，不要在混匀器上强烈振荡。
制备血浆标本需借助于抗凝剂，而血清标本只要待血清天然凝固、待其收缩后即可取得。也可在板孔中加入稀释液，再在其加入血清标本，然后在微型震荡器上震荡1分钟以混和。
一般说来，在5天内测定的血清标本可放置于4℃，超过一周测定的需低温冰存。可用作ELISA测定的标本十分广泛，体液、分泌物和排泄物等均可作标本以测定其中某种抗体或抗原成份，ELISA试剂盒中本次试验不需用的部分应及时放回冰箱保留。
2、固相载体
加酶结合物应用液和底物用液时可用定量多道加液器，使加液过程迅速完成。如有细菌污染，菌体中可能含有内源性HRP，也会产生假阳性反应。每次加标本应更换吸嘴，以发生交叉污染，也可用一次性的定量塑料管加样。
良好的仪器和准确的操纵是ELISA试剂盒检测结果正确可靠的必要条件。ELISA顶用的蒸馏水或去离子水，包括用于洗涤的，应为新鲜的和高质量的。有些标本可直接进行测定，有些则需经预处理。
3、标本因素
血清标本可按常规方法采集，应留意避免溶血，红细胞溶解时会开释出具有过氧化物酶活性的物质，以HRP为标记的ELISA测定中，溶血标本可能会增加非特异性显色。
如在冰箱中保留过久，其中的可发生聚合，在间接法ELISA试剂盒中可使本底加深。本文将叙述板式ELISA各个操纵步骤的留意要点，国外试剂均与特殊仪器配合应用，严格遵照划定操纵，必能得出正确的结果。
原创作者：上海通蔚实业有限公司
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