在选择符合科研要求的同时并且要求高品质的小鼠ELISA检测试剂盒,使实验结果更标准,那么在ELISA实验之该如何选择合适的试剂盒呢?小鼠ELISA检测试剂盒的选择对于ELISA实验很重要,上海通蔚生物为你总结,一起来看看吧!
1 查找待测样本的蛋白浓度
通过检索SCI文献、Genecards、Mayocliniclabs等,获得目标蛋白的表达部位及表达浓度参考值,比较小鼠ELISA检测试剂盒中给出的样本测值与参考值是否一致。
2 明确试剂盒的应用种属检测的样本类型
不同厂家验证的样本类型不同。除试剂盒特别说明外,一般情况下,不同种属不能通用。常见待测样本类型有:血清、血浆、细胞上清、组织匀浆、细胞裂解液等。实验,需要判断试剂盒能否满足目标物种的目标蛋白检测。
3 明确试剂盒的检测范围
试剂盒的检测范围即标准曲线范围。标准曲线范围不等同于样本浓度范围,所以,要特别注意判断待测样本浓度是否落在标准曲线范围内。对于浓度很高的样本,建议先通过预实验,摸索出合适的稀释倍数后,再大量测定样本。
4 明确试剂盒的质控标准
稀释线性
一般指样本稀释线性,即:将样本梯度稀释,看各稀释梯度浓度是否成线性;对于高浓度样本,建议选择OD值落在标曲范围中部的稀释倍数为释倍数。
回收率:
评估试剂盒测量结果趋于真实值程度的指标。一般添加标准品(重组蛋白)到天然样本基质内,进行测定。通常,线性及回收率的范围在80%-120%比较合适。
天然样本检测:
确保试剂盒可以检测天然样本及合适的样本类型。可根据靶蛋白性质对天然样本进行选择,例如:血清、血浆、细胞上清、尿液、唾液和乳汁等。
交叉反应:
通过交叉反应评估试剂盒的特异性。交叉反应越小,说明小鼠ELISA检测试剂盒的特异性越好。
①与同家族其他蛋白或结构类似物的交叉反应。
②与其他种属相同靶点蛋白的交叉反应。
③与血清中常见因子的交叉反应。
干扰试验:
判断其他分子与抗原-抗体对之间相互作用的影响。干扰性越大,待测物测定值越不准确。
①评估靶蛋白配体的干扰。
②评估靶蛋白受体的干扰。
稳定性:
判定试剂盒在规定条件下储存时间长短的标准。一般通过热加速稳定性实验验证。
①将试剂盒在37℃条件下放置7天,与4℃条件下放置的相同产品进行比较。
②各项性能检测结果的偏差均应<15%。
精密度:
试剂盒重复实验时,误差大小的评估标准。通常用CV表示。一般情况下,批间、批内变异系数(CV)均应<15%。
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