1.血清使用时一定需要灭活么?
实验显示,经过正确处理的热灭活血清对大多数的细胞而言是不需要的。经此处理过的血清对细胞的生长只有微小的促进,或*没有任何作用,甚至因为高温处理影响了血清的质量,而造成细胞生长速率的降低。而经过热处理的血清,沉淀物的形成会显著的增多,这些沉淀物在倒置显微镜下观察,像是“小黑点”,常常会让研究者误以为是血清遭受污染,而把血清放在37℃环境中,又会使此沉淀物更增多,使研究者误认为是微生物的分裂扩增。若非必须,可以不需要做热处理这一步。不但节省时间,更确保血清的质量。
2.保存血清方法?
我们建议血清应保存在-5℃至-2O℃。若存放于4℃时,请勿超过一个月。若一次无法用完一瓶,建议无菌分装血清至恰当的灭菌容器内,再放回冷冻。
3.如何解冻血清才不会使产品质量受损?
将血清从冷冻箱取出后,先置于2~8℃冰箱使之融解,然后在室温下使之全融。但必须注意的是,融解过程中必须规则地摇晃均匀。
4.血清解冻后发现有絮状沉淀物出现,该如何处理?
血清中沉淀物的出现有许多种原因,但普遍的原因是由于血清中脂蛋白的变性所造成,而血纤维蛋白在血清解冻后,也会存在于血清中,亦是造成沉淀物的原因。但这些絮状沉淀物,并不影响血清本身的质量。若去除这些絮状沉淀物,可以将血清分装至无菌离心管内,以400g稍微离心,上清液即可接着加入培养基内一起过滤。不使用过滤的方法去除这些絮状沉淀物,因为它可能会阻塞过滤膜。
5.如何避免血清中沉淀物的产生?
①解冻血清时,请按照所建议的逐步解冻法(-20℃至4℃至室温),若血清解冻时改变的温度太大(如-20℃至37℃),非常容易产生沉淀物。
②解冻血清时,请随时将之摇晃均匀,使温度及成分均一,减少沉淀的发生。
③请勿将血清置于37℃太久。若在37℃放置太久,血清会变得混浊,同时血清中许多较不稳定的成分会因此受到损害,而影响血清的质量。
④血清的热灭活非常容易造成沉淀物的增多,若非必要,可以无须做此步骤。
⑤若必须做血清的热灭活,请遵守56℃,30分钟的原则,并且随时摇晃均匀。温度过高,时间过久或摇晃不均匀,都会造成沉淀物的增多。
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