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技术文章

上海通蔚生物完全培养基常见样本的制备与技术分析

点击次数:23 发布时间:2024/8/8 9:15:58

完全培养基是当代培养基分析技术,包括培养基计数、培养基内/外抗原分子检测、培养基中DNA和RNA的倍体分析、培养基的生物学特性及功能分析等。

对于流式细胞分析而言,样本制备的好坏对终的检测结果有很大的影响。在免疫学和血液学中,应用流式培养基技术分析的样本多为外周血、骨髓、各类体液(如脑脊液、胸水、腹水)以及人体的组织(如淋巴结、脾、肝等),这几种样本要如何制备和保存呢?

保存方法

收集样本后置于加有抗凝剂(一般选择肝素或EDTA)的试管中,室温保存,尽量在12 h内处理样本;若无法及时处理,4℃保存,此时好选择肝素抗凝管。一般不需要特殊处理制备单细胞悬液,所用试剂为淋巴细胞分离液和红细胞裂解液。但在临床检测中,为了避免细胞成分丢失,通常不推荐使用淋巴细胞分离液分离单核细胞。

EDTA适用于白细胞的免疫表型分析,可防止成熟的髓系细胞贴壁造成细胞损失,并具有较强的抗血小板凝集能力,但对细胞活性的保持不如肝素抗凝。原代细胞同时EDTA是二价阳离子的强螯合剂,会影响与Ca2+相关的抗原位点(如CD11b等),并会抑制与Ca2+ 相关的细胞功能。肝素常用于白细胞功能研究,可维持Ca2+和Mg2+在细胞内的生理浓度,更好保持细胞活性,适用于放置时间较长、不能及时检测的样本,但不适合血小板的相关检测。收集样本后置于肝素抗凝管中,室温保存,且尽量在12 h内处理样本。若无法及时处理,则4℃保存,时间好不超过48 h。

处理方法

样本1000-1500 rpm离心5 min,弃去上清;

加入含有0.1%牛血清白蛋白的磷酸盐缓冲液(PBS),离心洗涤5 min;

加入适量PBS重悬。如有细小沉淀,用300目尼龙网过滤后备用。

切取新鲜组织样本置于生理盐水或PBS中,室温保存,原代细胞尽量在12 h内处理样本;若无法及时处理,4℃保存,保存时间好不要超过48 h。不建议用甲醛、乙醇固定细胞,不要用酶、表面活性剂处理细胞。

操作说明 :

1)封板膜只做一次性使用。 

2)标本中待测物含量过高时先将样本稀释一定倍数后再测定,计算时请*后乘以稀释倍数。

3)各步加样均使用加样器,并经常校对其正确性,一次加样时间控制在5分钟内。

4)液体标本置4℃保存应小于1周,-20℃或-80℃均应密封保存,-20℃不应超过1个月,-80℃不应超过2个月,标本溶血会影响*后检测结果,因此溶血标本不宜进行此项检测。

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原创作者:上海通蔚实业有限公司

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