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上海通蔚实业ELISA试剂盒试验的三个基本原理

点击次数:191发布时间:2023/7/26

ELISA法是免疫诊断中的一项新技术,现已成功地应用于多种病原微生物所引起的传染病、寄生虫病及非传染病等方面的免疫诊断,也已应用于大分子抗原和小分子抗原的定量测定,根据已经使用的结果,认为ELISA法具有灵敏、特异、简单、快速、稳定及易于自动化操作等特点。
 
ELISA试剂盒不仅适用于临床标本的检查,而且由于一天之内可以检查几百甚至上千份标本,因此,也适合于血清流行病学调查。本法不仅可以用来测定抗体,而且也可用于测定体液中的循环抗原,所以也是一种早期诊断的良好方法:
A、抗原或抗体能以物理性地吸附于固相载体表面,可能是蛋白和聚苯yi烯表面间的疏水性部分相互吸附,并保持其免疫学活性。
B、抗原或抗体可通过共价键与酶连接形成酶结合物,而此种酶结合物仍能保持其免疫学和酶学活性。
C、酶结合物与相应抗原或抗体结合后,可根据加入底物的颜色反应来判定是否有免疫反应的存在,而且颜色反应的深浅是与标本中相应抗原或抗体的量成正比例的,因此,可以按底物显色的程度显示试验结果。 
由于酶标记抗原或抗体是酶分子与抗原或抗体分子的结合物,它可以催化底物分子发生反应,产生放大作用,正因为此种放大作用而使本法具有很高的敏感性。又由于小鼠ELISA试剂盒法一方面是建立在抗原与抗体免疫学反应的基础上,因而,具有特异性。
 
ELISA试剂盒加板时产生气泡的处理办法:
A、使用吹风机,将吹风机打开,并调节到高温度,对96孔板吹1-2就可以了。
B、采用更好材质的板、或采用门的96孔板振荡器。
C、可以用tip吸走,但实验中费事、效果还不是很理想。
D、使用注射器针头扎破。
 
ELISA试剂盒使用时需留心的细节:
A、标本制备要规范,每份标本体积要按2-3个复孔以上的量制备(贮存),尽量分装做备份,短期内无法实验者,注意低温保存。
B、根据检测标本数量确定所需试剂盒的量。
C、按说明书将所用试剂盒平衡至室温,配制所需试剂盒,DIY夹心法ELISA常见技术指南。
D、选择抗体时选择一个单抗和一个多抗进行配对,若选择两个单抗,必须识别不同表位的抗体,从同一家公司选择抗体。
E、若使用过氧化物酶作为显色系统,应严禁在洗液和稀释液中加叠氮钠,叠氮钠可抑制过氧化物酶的活性。
F、当测定混合液体中的抗原时,如血清,建议在标本稀释液中加不相干的Ig。
G、准备好所有实验额外所需物品,如试管、吸头、移液器、离心机等。
不管是试剂盒,还是其它产品,在使用之都要仔细阅读说明书,同时确定试剂盒是不是在有效期内。

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