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小双节RNA病毒RT-PCR试剂盒

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品牌名称：通蔚生物(进口品牌)型号：原产地：中国大陆发布时间：2023/6/28 11:09:12更新时间：2024/8/2 10:37:36

产品摘要：小双节RNA病毒RT-PCR试剂盒根据小双节RNA病毒的保守基因序列设计的引物，具有良好的特异性，灵敏度可以达到 1000 拷贝/反应，使用一管式RT-PCR技术，RT和PCR两步在一个试管内完成，不需要中间转移样品，降低了操作误差和可能的污染，本产品足够50次20μL体系的 RT-PCR。本产品只能用于科研，不能用于临床。

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通蔚生物

详细内容

小双节RNA病毒RT-PCR试剂盒

产品特点

1. 一站式，用户不需要单独准备每种成分，包括引物和对照。

2. 根据小双节RNA病毒的保守基因序列设计的引物，具有良好的特异性。

3. 灵敏度可以达到 1000 拷贝/反应。

4. 使用一管式 RT-PCR 技术，RT 和 PCR 两步在一个试管内完成，不需要中间转移样品，降低了操作误差和可能的污染。

5. 本产品足够 50 次 20μL 体系的 RT-PCR。

6. 本产品只能用于科研，不能用于临床。

参数规格

编号	成分	规格
试剂一	5×双酶一管式 RT-PCR Buffer	200 μL（橘黄盖）
试剂二	MMLV-Taq Mix	75 μL（红盖）
试剂三	超纯水	1 mL（亮黄盖）
试剂四	小双节RNA病毒 RT-PCR 引物混合液	100 μL（白盖）
试剂五	小双节RNA病毒 RT-PCR 阳性对照（1×10E8 /μL）	50 μL（黄盖）
试剂六	使用手册	1 份

注：为避免扩散传染性病原，本产品不提供活体样品做阳性对照，只提供一的DNA 片段作为阳性对照。

运输及保存：

低温运输，-20℃保存，保存期限为 12 个月。收到货后阳性对照需要跟其他成分分开放置，因为其容易污染其他成分，造成假阳性。

自备试剂：

样品 RNA。

使用方法

一、样品 DNA 的制备：

1. 如果有 N 个样品，必须设置 N+2 个提取，多出的一个是 PC（样品制备阳性对照），一个是NC（样品制备阴性对照）。可以用 10μL 小双节RNA病毒 PCR阳性对照的 1000 倍稀释液作为制备的阳性对照。可以用水作为制备的阴性对照。制备所得成为样品 RNA。

2. 用自选方法纯化 N+2 个样品的 RNA，本试剂盒跟市场上大多数病毒 RNA 提取试剂盒兼容。可以选购本公司的柱式病毒 RNAout。

二、设置RT-PCR反应(20 μL 体系)：

3. 如果有 N+2 个样品，则标记 N+4 个 PCR 管（额外增加的两个管一个是RT-PCR 阳性对照，另一个是 RT-PCR 阴性对照）并按照下表在 PCR 管中加入下列成分：

成份	N+2 个样品管	RT-PCR 阴性对照	RT-PCR 阳性对照
5×双酶一管式RT-PCR Buffer	各 4 μL	4 μL	4 μL
小双节RNA病毒 RT-PCR 引物混合液	各 2 μL	2μL	2μL
N+2 个制备的 RNA 样品	各 12.5μL	－－	－－
超纯水	－－	12.5μL	－－
小双节RNA病毒 RT-PCR 阳性对照的 1000倍稀释液	－－	－－	12.5μL
MMLV-Taq Mix	1.5 μL	1.5 μL	1.5 μL

4.上机进行 RT-PCR，RT-PCR 反应参数为:

过程	温度	时间
逆转录	42℃	30 min
预变性	95℃	5 min
PCR反应35个循环	95℃	30 sec
	58℃	30 sec
	72℃	20 sec
后延伸	72℃	7 min

三、电泳检测：

5. 琼脂糖电泳检测扩增效果。如果阴性对照有扩增产物或阳性对照无扩增产物，则说明实验失败，需要分析实验失败的原因。只有在阴性对照没有扩增产物、阳性对照必须有预期条带出现，才有必要分析样品的实验结果，如果有预期片段大小的扩增产物则为阳性，如果无则为阴性。
RT-PCR检测试剂盒仅用于科研，小双节RNA病毒RT-PCR试剂盒不能用于临床诊断，不得用于其他用途。

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