细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104 个）：提取液体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 20％或 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）；8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。

组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。

2、血清（浆）样品：直接检测。

超氧化物歧化酶(SOD)检测试剂盒(NBT法)/微量法

测定步骤：

1、酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 560nm。

2、将试剂二用蒸馏水稀释两倍，用多少配多少。（试剂二和蒸馏水 1：1 稀释）

3、将一瓶试剂四用 5mL 蒸馏水溶解（溶解后一周内用完），再用蒸馏水稀释 4 倍，用多少配多少（试剂四和蒸馏水 1：3 稀释）。

4、测定将试剂一、三和四在 37℃（哺乳动物）或 25℃（其他物种）水浴 5min 以上。

5、样本测定（在 EP 管或 96 孔板中依次加入下列试剂）

试剂名称（μL）	测定管	对照管
试剂一	45	45
试剂二	2	2
样本	18
蒸馏水		18
试剂三	35	35
试剂四	100	100

充分混匀，室温静置 30min 后，560nm 处测定各管吸光值 A。

注意事项：

1、试剂二为酶，不可冷冻，使用时在冰上放置。

2、对照管只需要做一管。

3、若对照管吸光值大于 1，建议将试剂二用蒸馏水稀释 7 倍后使用（10μL 试剂二原液+60μL蒸馏水）。

4、SOD 为什么有的样本测定管大于对照管，对照管数值在什么范围？
对照管的范围是 0.4-1。对照管吸光值过低可能是

（1）试剂二或试剂四没有现配现用；

（2)　没有按顺序加试剂；

（3）反应时间不够，可以延长反应时间（反应时间 30min 可以延长到 40min）。对照管吸光值过高可能是试剂二未按操作说明书稀释相应倍数。若出现测定管大于对照管，可能是样本中杂质的影响太大，为了降低杂质的影响一般将样本提取上清液用蒸馏水或提取液稀释 10 倍后再测，通常可以使测定正常。计算公式中乘以相应稀释倍数。

SOD 活性计算：

1、抑制百分率的计算

抑制百分率＝(A 对照管－A 测定管) ÷A 对照管× 100%

尽量使样本的抑制百分率在 10-90%范围内。如果计算出来的抑制百分率小于 10%或大于90%，则通常需要调整加样量后重新测定。如果测定出来的抑制百分率偏高，则需将样本用提取液适当稀释；如果测定出来的抑制百分率偏低，则需重新准备浓度比较高的待测样本。

2、SOD 酶活性单位：

在上述黄嘌呤氧化酶藕联反应体系中抑制百分率为 50%时，反应体系中的 SOD 酶活力定义为一个酶活力单位(U/mL)。

3、SOD 酶活性计算：

（1）血清（浆）SOD 活性(U/mL)=[抑制百分率÷(1－抑制百分率)×V 反总]÷V 样=11.11×抑制百分率÷(1－抑制百分率)

（2）组织、细菌或培养细胞

SOD 活力计算：

a. 按样本蛋白浓度计算

SOD 活性(U/mg prot)=[抑制百分率÷(1－抑制百分率)×V 反总]÷(V 样×Cpr)=11.11×抑制百分率÷(1－抑制百分率)÷Cpr需要另外测定，建议使用本公司 BCA 蛋白质含量测定试剂盒。