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过氧化氢酶(CAT)检测试剂盒(钼酸铵比色法)/微量法
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品牌名称：通蔚生物(进口品牌)型号：100管/96样 原产地：中国大陆 发布时间：2023/8/1 14:05:10更新时间：2024/8/2 10:38:15
产品摘要：过氧化氢酶(CAT)检测试剂盒(钼酸铵比色法)/微量法广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，是主要的 H2O2 清除酶，在活性氧清除系统中具有重要作用。过氧化氢能氧化 MoO42-成MoO52-,MoO52-接受氢氧根的电子成键，分子间立即脱水缩合，得到稳定的黄色复合物(H2MoO4·XH2O)n在405nm处有强烈吸收峰，其吸光值和过氧化氢浓度成线性关系。
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详细内容
过氧化氢酶(CAT)检测试剂盒(钼酸铵比色法)/微量法
CAT(EC 1.11.1.6)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，是主要的 H2O2 清除酶，在活性氧清除系统中具有重要作用。
过氧化氢能氧化 MoO42-成 MoO52-,MoO52-接受氢氧根的电子成键，分子间立即脱水缩合，得到稳定的黄色复合物(H2MoO4·XH2O)n 在 405nm 处有强烈吸收峰，其吸光值和过氧化氢浓度成线性关系。测定出体系剩余过氧化氢在 405nm 的吸光值即可反映 CAT 的催化活性。
需自备的仪器和用品：
酶标仪、台式离心机、可调式移液器、96 孔板、研钵、冰和蒸馏水
试剂组成和配制：
提取液：液体 100 mL×1 瓶，4℃保存；
试剂一：液体 5 mL×1 瓶，4℃避光保存；
试剂二：液体 15 mL×1 瓶，常温保存；（过饱和试剂，如有结晶析出，可 37℃加热搅拌溶解）试剂三：液体 30 mL×1 瓶，4℃保存；(过饱和试剂，如有絮状沉淀，可 37℃加热搅拌溶解)
粗酶液提取：
1、细菌、细胞或组织样品的制备：
细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104 个）：提取液体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 20％或 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）； 8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
2、血清（浆）样品：直接检测。
过氧化氢酶(CAT)检测试剂盒(钼酸铵比色法)/微量法
测定步骤：
1、 酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 405 nm。
2、在 EP 管中加入下列试剂
| 试剂名称（μL） | 测定管 | 试剂名称（μL） |
| 对照管 |
| 样本 | 50 | 试剂一 |
| 30 |
| 试剂一 | 30 | 试剂二 |
| 100 |
| 混匀，25℃准确反应 10 min | 试剂三 |
| 265 | |
| 试剂二 | 100 |
| 混匀 | |
| 试剂三 | 265 | 样本 |
| 50 |
混匀，取 200μL 于 96 孔板立即测定 A 测定和 A 对照， A=A 对照-A 测定。每个测定管需设一个对照管。
CAT 活性计算：
1、标准曲线：y = 0.1x + 0.0013 R2 = 1
x：体系中过氧化氢浓度变化值（μmol/mL）y：吸光值差值 A
2、血清（浆）CAT 活力的计算:
单位的定义：每毫升血清（浆）每分钟催化 1μmol H2O2 降解定义为一个酶活力单位。
CAT(μmol /min/mL)= =( A-0.0013)÷0.1×V 反总÷V 样÷T =8.9×( A-0.0013)
3、组织、细菌或细胞中 CAT 活力计算：
（1）按样本蛋白浓度计算：
单位的定义：每 mg 组织蛋白每分钟催化 1μmol H2O2 降解定义为一个酶活力单位。 CAT(μmol/min/mg prot)=( A-0.0013)÷0.1×V 反总÷(V 样×Cpr) ÷T=8.9×( A-0.0013)÷Cpr
（2）按样本鲜重计算：
单位的定义：每 g 组织每分钟催化 1μmol H2O2 降解定义为一个酶活力单位。
CAT(μmol/min/g 鲜重)=( A-0.0013)÷0.1×V 反总÷（W× V 样÷V 样总）÷T=8.9×( A-0.0013)÷W
V 反总：反应体系总体积，0.445 mL；V 样：加入样本体积，0.05 mL；V 样总：加入提取液体积，1 mL；T：反应时间，10 min；W：样本质量，g；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL。
1、 预实验若发现酶活性过高（A 测定＜0.1），可用提取液适当稀释样品后测定，并在计算公式中乘以相应稀释倍数。
2、 若 A 对照＜A 测定，一方面可能是酶活性过低，可将反应时间 10 延长到 30min,另一方面可能样本中杂质干扰严重，可将样本稀释 5 倍左右后测定，并在计算公式中代入实际反应时间和乘以相应稀释倍数。
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