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铜蓝蛋白(Cp)含量检测试剂盒/微量法
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品牌名称：通蔚生物(进口品牌)型号：100T/48S 原产地：中国大陆 发布时间：2023/8/1 15:01:46更新时间：2024/8/2 8:52:29
产品摘要：铜蓝蛋白(Cp)含量检测试剂盒/微量法铜蓝蛋白是血浆的含铜蛋白，有运输铜的功能，同时具有氧化酶的活性，是细胞外液重要的抗氧化剂。铜蓝蛋白催化3,3’,5,5’-四甲基联苯胺生成蓝色产物，在645nm处有特征吸收峰，依此可得铜蓝蛋白活性。
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详细内容
铜蓝蛋白(Cp)含量检测试剂盒/微量法
注意事项
正式测定之选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
正式测定之选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
铜蓝蛋白是血浆的含铜蛋白，有运输铜的功能，同时具有氧化酶的活性，是细胞外液重要的抗氧化剂。
铜蓝蛋白催化3,3’,5,5’-四甲基联苯胺生成蓝色产物，在645nm处有特征吸收峰，依此可得铜蓝蛋白活性。
自备实验用品及仪器:
天平、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板和蒸馏水。
试剂组成和配制:
试剂一：液体10mL×1瓶，4℃保存。
试剂二：液体7mL×1瓶，4℃保存。
试剂三：液体15mL×1瓶，4℃避光保存。（使用37℃预热）
样本处理：
1、血清（浆）等液体样本：直接检测。
2、动植物组织样本：称取约0.1g组织，加入1mL蒸馏水，进行冰浴匀浆。10000g ，4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
铜蓝蛋白(Cp)含量检测试剂盒/微量法
测定操作表:
1、分光光度计/酶标仪预热30min以上，调节波长至645nm，蒸馏水调零。
2、操作表
|
| 空白管 | 测定管 |
| 样品（µL） | 30 | 30 |
| 试剂一（µL） | 90 | 90 |
| 试剂二（µL） | 60 |
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| 混匀，37℃预热5min | ||
| 试剂三（µL） | 120 | 120 |
| 混匀，37℃反应30min | ||
| 试剂二（µL） |
| 60 |
| 混匀，25℃室温放置5min，取200µL于微量石英比色皿/96孔板中，测定645nm处吸光值。 ΔA=A测定-A空白。 | ||
计算公式:
a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下
1. 按体积计算
酶活定义:37℃条件下， 每分钟每毫升样品与底物作用吸光度升高0.01为一个酶活单位。
Cp活力（U/mL）=ΔA×V反总÷0.01÷V样÷T = 33.33×ΔA
2. 按鲜重计算
单位定义：37℃条件下，每分钟每克样品与底物作用吸光值升高0.01为一个酶活单位。
Cp活力（U/g鲜重）=ΔA×V反总÷0.01÷（W×V样÷V样总）÷T = 33.33×ΔA÷W
3. 按蛋白浓度计算
单位定义：37℃条件下，每分钟每毫克蛋白样品与底物作用吸光值升高0.01为一个酶活单位。
Cp活力（U/ mg prot）=ΔA×V反总÷0.01÷（Cpr×V样）÷T = 33.33×ΔA÷Cpr
V样：0.03 mL；V反总：0.3 mL；T：反应时间，30min；V样总：加入提取液体积，1mL； Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g
b. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下
1、按体积计算
酶活定义:37℃条件下， 每分钟每毫升样品与底物作用吸光度升高0.005为一个酶活单位。
Cp活力（U/mL）=ΔA×V反总÷0.005÷V样÷T = 66.66×ΔA
2、按鲜重计算
单位定义：37℃条件下，每分钟每克样品与底物作用吸光值升高0.005为一个酶活单位。
Cp活力（U/g鲜重）=ΔA×V反总÷0.005÷（W×V样÷V样总）÷T = 66.66×ΔA÷W
3、按蛋白浓度计算
单位定义：37℃条件下，每分钟每毫克蛋白样品与底物作用吸光值升高0.005为一个酶活单位。
Cp活力（U/ mg prot）=ΔA×V反总÷0.005÷（Cpr×V样）÷T = 66.66×ΔA÷Cpr
V样：0.03 mL；V反总：0.3 mL；T：反应时间，30min；V样总：加入提取液体积，1mL； Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g
注意事项:
试剂二和试剂三有一定的毒性和刺激性，请操作时做好防护措施。
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