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超氧阴离子(OFR)检测试剂盒/微量法

价格:¥电议

品牌名称:$brandModel.Title(进口品牌)型号:100T/96S 原产地:中国大陆 发布时间:2023/8/1 16:11:16更新时间:2024/12/16 15:27:04

产品摘要:超氧阴离子(OFR)检测试剂盒/微量法生物体内超氧阴离子等活性氧具有免疫和信号传导的作用,但积累过多时会对细胞膜及生物大分子产生破坏作用,导致机体细胞和组织代谢异常,从而引起多种疾病。超氧阴离子与盐酸羟胺反应生成 NO2-,NO2-在对氨基苯磺酸和α-萘胺的作用下,生成红色的偶氮化合物。

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详细内容

超氧阴离子(OFR)检测试剂盒/微量法
注意事项
正式测定之选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。
生物体内超氧阴离子等活性氧具有免疫和信号传导的作用,但积累过多时会对细胞膜及生物大分子产生破坏作用,导致机体细胞和组织代谢异常,从而引起多种疾病。
超氧阴离子与盐酸羟胺反应生成 NO2-,NO2-在对氨基苯磺酸和 α-萘胺的作用下,生成红色的偶氮化合物,在 530nm 处有特征吸收峰,根据 ΔA 值可以计算样品中 O2-含量,反应式为NH2OH + 2O2-  +H+  → NO2-  + H2O2 + H2O。
自备实验用品及仪器:
天平、水浴锅、离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板、氯/仿和蒸馏水。
试剂组成和配制:
提取液:液体 110mL×1 瓶,4℃保存。
试剂一:液体 20mL×1 瓶,4℃保存。
试剂二:液体 15mL×1 瓶,4℃避光保存。
试剂三:液体 15mL×1 瓶,4℃避光保存。
试剂四:氯/仿,自备。
超氧阴离子提取:
1. 植物、动物组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入 1mL 提取液)进行冰浴匀浆,然后,10000g,4℃,离心 20min,取上清置于冰上待测。
2. 细菌、真菌:按照细胞数量(104 个):提取液体积(mL)为 500~1000:1 的比例(建议 500 万细胞加入 1mL 提取液),冰浴超声波破碎细胞(功率 300w,超声 3 ,间隔 7 ,总时间 3min);然后 10000g,4℃,离心 20min,取上清置于冰上待测。
3. 血清或培养液:直接测定。
超氧阴离子(OFR)检测试剂盒/微量法
测定操作表:
1、 分光光度计/酶标仪预热 30min,调节波长至 530nm。
2、操作表
超氧阴离子含量计算公式:
a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下
标准曲线:y = 0.0242x - 0.0027,R2=0.9980
1. 组织:
(1)按照样本质量计算
超氧阴离子含量(nmol/g 鲜重)= (ΔA+0.0027)÷0.0242×V 反总÷(V 样÷V 样总×W)×2=148.76×(ΔA+0.0027)÷W
超氧阴离子产生速率(nmol/ g·min)=148.76×(ΔA+0.0027)÷W÷T =7.44×(ΔA+0.0027)÷W
(2)按照蛋白质浓度计算
超氧阴离子含量(nmol/mg prot)= (ΔA+0.0027)÷0.0242×V 反总÷(V 样×Cpr)×2 =148.76×(ΔA+0.0027)÷Cpr
超氧阴离子产生速率(nmol/ mg prot·min)= 148.76×(ΔA+0.0027)÷Cpr÷T =7.44×(ΔA+0.0027)÷Cpr
2. 细菌,真菌:
超氧阴离子含量(nmol/104 cell)= (ΔA+0.0027)÷0.0242× V 反总÷(V 样÷V 样总×细胞数量)×2=148.76×(ΔA+0.0027)÷细胞数量
超氧阴离子产生速率(nmol/104 cell·min)= 148.76×(ΔA+0.0027)÷细胞数量÷T=7.44×(ΔA+0.0027)÷细胞数量
3. 血清或培养液
超氧阴离子 含量(nmol/mL)= (ΔA+0.0027)÷0.0242×V 反总÷V 样×2 =148.76×(ΔA+0.0027)
超氧阴离子产生速率(nmol/mL·min)= 148.76×(ΔA+0.0027) ÷T = 7.44×(ΔA+0.0027)
V 样总:加入提取液体积,1 mL; V 反总:反应总体积,0.36mL;V 样:反应中样品体积,0.2mL;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样品质量,g;T:反应时间,20min;2: 2 分子 O2-参与反应生成 1 分子 NO2-。
b. 用 96 孔板测定的计算公式如下
标准曲线:y = 0.0121x - 0.0027,R2 = 0.9980
1. 组织:
(1)按照样本质量计算
超氧阴离子含量(nmol/g 鲜重)= (ΔA+0.0027)÷0.0121×V 反总÷(V 样÷V 样总×W)×2=297.52×(ΔA+0.0027)÷W
超氧阴离子产生速率(nmol/ g·min)=297.52×(ΔA+0.0027)÷W÷T =14.88×(ΔA+0.0027)÷W
(2)按照蛋白质浓度计算
超氧阴离子含量(nmol/mg prot)= (ΔA+0.0027)÷0.0121×V 反总÷(V 样×Cpr)×2 =297.52×(ΔA+0.0027)÷Cpr超氧阴离子产生速率(nmol/ mg prot·min)= 297.52×(ΔA+0.0027)÷Cpr÷T =14.88×(ΔA+0.0027)÷Cpr
2. 细菌,真菌:
超氧阴离子含量(nmol/104 cell)=(ΔA+0.0027)÷0.0121× V 反总÷(V 样÷V 样总×细胞数量)×2=297.52×(ΔA+0.0027)÷细胞数量
超氧阴离子产生速率(nmol/104 cell·min)=297.52×(ΔA+0.0027)÷细胞数量÷T=14.88×(ΔA+0.0027)÷细胞数量
3. 血清或培养液
超氧阴离子 含量(nmol/mL)=(ΔA+0.0027)÷0.0121 ×V 反总÷V 样×2 =297.52×(ΔA+0.0027)
超氧阴离子产生速率(nmol/mL·min)= 297.52×(ΔA+0.0027) ÷T =14.88×(ΔA+0.0027)
V 样总:加入提取液体积,1 mL; V 反总:反应总体积,0.36mL;V 样:反应中样品体积,0.2mL;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样品质量,g;T:反应时间,20min;2:2分子 O2-参与反应生成 1 分子 NO2-。
注意事项:
1、 OD 值大于 1,样品适当稀释再测定,注意计算公式里乘以稀释倍数。
2、 样品制备好后,立刻进行测定,请勿将样品进行长时间的低温保存,以免影响测定结果。
3、 试剂四有一定的毒性,请操作时做好防护措施。
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