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Fd-谷氨酸合成酶(Fd-GOGAT)检测试剂盒/微量法
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品牌名称：通蔚生物(进口品牌)型号：100管/48样 原产地：中国大陆 发布时间：2023/8/1 16:49:28更新时间：2024/12/16 15:27:04
产品摘要：Fd-谷氨酸合成酶(Fd-GOGAT)检测试剂盒/微量法广泛分布于植物中，和谷氨酰胺合成酶共同构成GS/GOGAT循环，参与氨同化的调控。GOGAT分为以NADH为还原剂的NADH-GOGAT 和以铁氧还蛋白为还原剂的Fd-GOGAT。Fd-GOGAT 主要存在于叶绿体基质中，与光合作用和光呼吸有关，主要同化NO3-还原和光呼吸产生的NH4+。
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详细内容
Fd-谷氨酸合成酶(Fd-GOGAT)检测试剂盒/微量法
混匀，25℃反应 30min，450nm 下测定吸光值 A 测定与对照，△A=A 测定-A 对照，每个测定管设一个对照管。
注意事项
正式测定务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定
正式测定务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定
GOGAT 广泛分布于植物中，和谷氨酰胺合成酶共同构成 GS/GOGAT 循环，参与氨同化的调控。GOGAT 分为以 NADH 为还原剂的 NADH-GOGAT 和以铁氧还蛋白为还原剂的Fd-GOGAT。Fd-GOGAT 主要存在于叶绿体基质中，与光合作用和光呼吸有关，主要同化NO3-还原和光呼吸产生的 NH4+。
Fd-GOGAT 催化谷氨酰胺的氨基转移到 α-酮戊二酸，形成两分子的谷氨酸，谷氨酸脱氢酶催化谷氨酸的脱氢反应，同时产生 NADH，使 WST-8 显橙黄色，在 450 nm 下测定吸光值。
需自备的仪器和用品：
酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、96 孔板、研钵、冰和蒸馏水。
试剂组成和配制：
提取液：液体 100mL×1 瓶，4℃保存；
试剂一：粉剂×1 瓶，4℃保存；临用加入 12mL 试剂六溶解待用，用不完的试剂 4℃保存；
试剂二：液体 6mL×1 瓶，4℃避光保存；
试剂三：粉剂×1 瓶，4℃保存；临用加入 5mL 蒸馏水溶解待用，用不完的试剂 4℃保存；
试剂四：粉剂×1 瓶，-20℃保存；临用加入 20mL 试剂六溶解待用，用不完的试剂分装后-20℃保存；
试剂五：液体 3mL×1 瓶，4℃避光保存；
试剂六：液体 40mL×1 瓶，4℃保存；
粗酶液提取：
按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液），进行冰浴匀浆。10000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
Fd-谷氨酸合成酶(Fd-GOGAT)检测试剂盒/微量法
测定步骤：
1、 酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 450nm。
2、 样本测定
在 EP 管中加入如下试剂
| 试剂名称（μL） | 测定管 | 对照管 |
| 试剂一 | 100 | 50 |
| 试剂二 | 100 | 50 |
| 充分混匀，30℃保温 5min | ||
| 样本 | 50 | 50 |
| 试剂三 | 50 |
|
| 水 |
| 50 |
| 充分混匀，30℃准确反应 30min，95℃水浴 5min 终止反应，冷却后 10000g 4℃离心 5min，取上清液待测 | ||
3、 工作液配制
临用按试剂四：试剂五=180:20（μL）的比例配制工作液，用多少配多少。
4、 谷氨酸含量测定
在 96 孔板中加入如下试剂
| 试剂名称（μL） | 测定管 | 对照管 |
| 上清液 | 20 | 20 |
Fd-GOGAT 活性计算：
标准曲线为 y = 2.2168x - 0.0005，R2 = 0.9996；其中x 为标准品浓度 μmol/mL, y 为吸光值△A。
1、按样本蛋白浓度计算：
单位的定义：每 mg 组织蛋白每分钟产生 1 nmol 的谷氨酸定义为一个酶活力单位。Fd-GOGAT（nmol/min/mg prot）=（ΔA+0.0005）÷ 2.2168×V 反总÷(V 样×Cpr) ÷T×1000=75.2×（ΔA+0.0005）÷Cpr
2、按样本鲜重计算：
单位的定义：每 g 组织每分钟产生 1 nmol 的谷氨酸定义为一个酶活力单位。Fd-GOGAT（nmol/min/g 鲜重）=（ΔA+0.0005）÷ 2.2168×V 反总÷(W× V 样÷V 样总) ÷T×1000=75.2×（ΔA+0.0005）÷W
V 反总：反应体系总体积，0.25mL；ε：V 样：加入样本体积，0.05 mL；V 样总：加入提取液体积，1 mL；T：反应时间，30 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；1000，μmol 到 nmol 的换算系数。
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