血锌浓度检测试剂盒/微量法注意事项正式测定之选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
锌是必需的微量元素,在胰岛素和卟啉代谢中也起重要作用。
在pH 8.5~9.5的溶液中,Zn2+与锌试剂生成蓝色配位化合物,在620nm有大吸收峰。
自备仪器和用品:
离心机、可调式移液枪、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、蒸馏水和无水乙醇。
试剂组成和配制:
试剂一:液体20mL×1瓶,4℃保存。
试剂二:液体15mL×1瓶,4℃保存。
试剂三:粉剂×1瓶,4℃保存。临用1天配制,加入15mL无水乙醇充分溶解,盖紧,过夜待用。4℃保存可稳定约1个月,如颜色变黄,则已失效。
标准液:液体×1支,10 μ mol/L Zn2+标准液。4℃保存。
血锌浓度检测试剂盒/微量法
测定操作:
1. 分光光度计/酶标仪预热30 min,调节波长到620 nm,蒸馏水调零。
2. 标准液解冻:提取出标准液,置于室温下充分解冻后混匀。
3. 空白管:取1.5 mL EP管,依次加入100 μL蒸馏水,100μL试剂一,混匀;室温,13000g,离心10min,小心吸取上清液100 μL,加入0.5 mL EP管,加入100μL试剂二,100μL试剂三,充分混匀后13000g离心取上清,吸取200μL于微量石英比色皿/96孔板,620 nm测定吸光度,记为A空白管。
4. 标准管:取1.5 mL EP管,依次加入100 μL标准液,100 μL试剂一,混匀;室温,13000g,离心10min,小心吸取上清液100 μL,加入0.5 mL EP管,加入100μL试剂二,100μL试剂三,充分混匀后13000g离心取上清,吸取200μL于微量石英比色皿/96孔板,620 nm测定吸光度,记为A标准管。
5. 测定管:取1.5 mL EP管,依次加入100 μL血清,200 μL试剂一,混匀;室温,8000g,离心10min,小心吸取上清液100 μL,加入0.5 mL EP管,加入100μL试剂二,100μL试剂三,充分混匀后13000g离心取上清,吸取200μL于微量石英比色皿/96孔板,620 nm测定吸光度,记为A测定管。
注意:空白管和标准管只需测定一次。
血锌浓度计算公式:
血锌浓度(μ mol/ L)=C标准液×(A测定管-A空白管)÷(A标准管-A空白管)= 10×(A测定管-A空白管)÷(A标准管-A空白管)
C标准液:10 μ mol/L Zn2+
注意事项:
1. 试剂三需提一天配制,如变黄色则不能再使用。
2. 加入试剂三混匀后,要在30 min内完成该管测定。
3. 检出限为1μ mol/L。