土壤汞(S-Hg)浓度检测试剂盒/微量法注意事项正式测定之选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
土壤汞污染能够通过食物链传递和富集,对植物、动物和人类健康产生威胁。矿山开发、工业加工、农业生产和生活垃圾常常造成土壤汞污染,因此评价和防止土壤重金属污染常常需要测定土壤汞含量。
土壤经消化后,汞以Hg2+离子形式存在;Hg2+能与二硫腙生成橙色络合物,溶于三氯甲烷后,在490nm测定吸光度,即可计算S-Hg含量。
自备仪器和用品:
可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96孔板、恒温水浴锅、可调式移液枪、100目筛(可更小)、浓硫酸、浓盐酸、浓硝酸、三氯甲烷和蒸馏水。
试剂组成和配制:
标准品:液体×1支,4nmol/mL Hg标准液,4℃保存。
试剂一:自备。在该试剂瓶中加入52mL蒸馏水,36 mL浓盐酸,12mL浓硝酸,混匀,4℃避光保存。
试剂二:粉剂×1瓶,4℃避光保存。临用加18.4 mL蒸馏水充分溶解。
试剂三:粉剂×1瓶,4℃保存。临用加3 mL蒸馏水充分溶解。
试剂四:粉剂×1支,4℃保存。临用加1.5 mL蒸馏水充分溶解。
试剂五:粉剂×1瓶,4℃保存。临用加5.2 mL蒸馏水充分溶解。
试剂六:粉剂×1瓶,4℃避光保存。临用加20 mL三氯甲烷充分溶解。
土壤汞(S-Hg)浓度检测试剂盒/微量法
S-Hg检测:
1. 分光光度计/酶标仪预热30 min,体积波长到490 nm,三氯甲烷调零。
2. 样品管:风干的土壤,过100目筛后精确称取0.1 g左右,装入EP管;加入1 mL试剂一,充分混匀后沸水浴消化60 min。取出冷却后室温8000g离心10min,吸取20 μL上清液加入新的EP管;再先后加入180 μL蒸馏水和20 μL浓硫酸,混匀;后加入180 μL试剂二,混匀后40℃水浴24h,期间震荡数次。
2. 标准管:取EP管,加入20 μL标准液,180 μL蒸馏水和20 μL浓硫酸,混匀;后加入180 μL试剂二,混匀后40℃水浴24h,期间震荡数次。
3. 加入20 μL试剂三,震荡直到无色;开盖静置30min,期间摇荡数次,以排出气体。
4. 加入10 μL试剂四,充分混匀后静置5min;加入50μL试剂五,盖紧后震荡至少1min,静置10min以分层。
5. 小心吸取20 μL下层溶液,加入200 μL试剂六,震荡使无色,静置10 min以分层。
6. 小心吸取140 μL下层溶液,加入微量玻璃比色皿/96孔板,于490nm处比色,记录各管吸光值。记为A样品管和A标准管。
注意:标准管只需测定一次。
S-Hg浓度计算公式:
a. 使用微量石英比色皿测定的计算公式如下
Hg(nmol Hg/g 干重)=[C标×(A测定管÷A标准管)]×V总÷V样÷W=200×(A测定管÷A标准管)÷W
C标:标准液浓度,4 nmol/mL Hg;V总:上清液总体积,1 mL;W:土样质量,g;V样:加入上清液体积,20 μL=0.02 mL。
b. 使用96孔板测定的计算公式如下
Hg(nmol Hg/g干重)=[C标×(A测定管÷A标准管)]×V总÷V样÷W=200×(A测定管÷A标准管)÷W
C标:标准液浓度,4 nmol/mL Hg;V总:上清液总体积,1 mL;W:土样质量,g;V样:加入上清液体积,20 μL=0.02 mL。
注意事项:
1、试剂一有刺激性气味,易挥发,实验过程中应注意佩戴口罩和手套,使用完立即盖好盖子,以免试剂不够;
2、测定过程中需加入浓硫酸,加浓硫酸时需注意,避免溅到皮肤或眼睛上;
3、静置分层后,用1mL移液枪,排除空气后,轻轻插入下层溶液中,缓慢吸取下层溶液。