土壤无机磷(S-PHOS)含量检测试剂盒/微量法注意事项正式测定之选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
磷是植物必需大量元素。植物主要通过根系从土壤中获取磷元素。土壤磷包括有机磷和无机磷。土壤有机磷经过矿化分解而转化为无机磷,才能进一步被植物吸收利用。
从土壤中提取无机磷,在酸性环境中,通过钼蓝法定磷,即可计算出无机磷含量。
自备仪器和用品:
可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96孔板、台式离心机、可调式水浴锅,分析天平、可调式移液器、蒸馏水和100目筛子。
试剂组成和配制:
提取液:液体×1瓶,4℃保存。
试剂二:液体×1瓶,4℃保存。
试剂三:粉剂×1瓶,4℃避光保存。临用配制,加入8mL蒸馏水,充分溶解后加入4mL试剂二,混匀。
标准品:液体×1支,20μmol/L无机磷标准液,4℃保存。
土壤无机磷提取:
取10mL离心管,加入精确称取的100目筛子过筛的风干土样约0.01g,加入1mL提取液,震荡混匀,然后置于40℃水浴浸提1h,8000g,25℃,离心10min,取上清液,待测。
土壤无机磷(S-PHOS)含量检测试剂盒/微量法
测定步骤:
1. 分光光度计/酶标仪预热30 min以上,调节波长到660 nm,蒸馏水调零。
2. 打开水浴锅,调节温度到40℃。
3. 空白管:取EP管,依次加入100μL蒸馏水,100μL试剂三,混匀后置于40℃水浴保温10min,室温冷却10 min后于660 nm测定吸光度,记为A空白管。
4. 标准管:取EP管,依次加入10μL标准液,90μL蒸馏水,100μL试剂三,混匀后置于40℃水浴保温10min,室温冷却10 min后于660 nm测定吸光度,记为A标准管。
5. 测定管:取EP管,依次加入10μL上清液,90μL蒸馏水,100μL试剂三,混匀后置于40℃水浴保温10min,室温冷却10 min后于660 nm测定吸光度,记为A测定管。
需在40min内完成比色。
注意:空白管和标准管只需测定一次。
土壤无机磷含量计算公式:
a. 使用微量石英比色皿测定的计算公式如下
S-PHOS(μmol /g 干重)=[C标准液×(A测定-A空白)÷(A标准-A空白)]×V总÷W =0.02×(A测定-A空白)÷(A标准-A空白)÷W
C标准液:20 μmol/L;V总:总上清液体积,1 mL=0.001 L;W:土壤样品质量,g。
b. 使用96孔板测定的计算公式如下
S-PHOS(μmol /g干重)=[C标准液×(A测定-A空白)÷(A标准-A空白)]×V总÷W=0.02×(A测定-A空白)÷(A标准-A空白)÷W
C标准液:20 μmol/L;V总:总上清液体积,1 mL=0.001 L;W:土壤样品质量,g。
注意事项:
1. 试剂三需临用配制,限当天使用。试剂三配制过程中,可能会产生黑色固体,其不影响结果,注意吸取时不要将黑色固体吸入。
2. 40min内完成比色。