植物叶绿素(chlorophyll)含量检测试剂盒/微量法注意事项正式测定之选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
植物叶绿素广泛存在于绿色植物组织中,其含量与光合作用、营养状况密切相关,是反应植物生长状况的重要指标。
叶绿素a和叶绿素b在645nm和663nm处有大吸收,根据经验公式可计算得叶绿素a和叶绿素b以及总叶绿素含量。
自备实验用品及仪器:
天平、研钵、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、10mL玻璃试管、锡箔纸、丙酮。
试剂组成和配制:
试剂一:粉剂×1瓶,4℃保存。
植物叶绿素(chlorophyll)含量检测试剂盒/微量法
测定操作:
1. 称取约新鲜植物叶片或其它绿色组织,去掉中脉,称取约0.1g,剪碎,用蒸馏水洗干净。
2. 提取液的准备:取240mL蒸馏水和960mL丙酮,充分混匀待用。
3. 加入1mL蒸馏水,少量试剂一(约50mg),在黑暗或弱光条件下充分研磨,转入10mL玻璃试管。
4. 用提取液冲洗研钵,将所有冲洗液转入玻璃试管,用提取液补充至10mL,玻璃试管置于黑暗条件下或者包上锡箔纸浸提3h,观察试管底部组织残渣完全变白则提取完全,若组织残渣未完全变白,继续浸提至其完全变白。
5. 取浸提液200μL于微量石英比色皿/96孔板,提取液调零,测定663nm和645nm处吸光值,分别记为A663和A645 。
计算公式:
叶绿素a含量(mg/g 鲜重)=(12.7× A663 – 2.69 × A645)×V提×D÷m÷1000= 0.01×(12.7× A663 – 2.69 × A645)×D÷m
叶绿素b含量(mg/g 鲜重)=(22.9× A645 – 4.68 × A663)×V提×D÷m÷1000= 0.01×(22.9× A645 – 4.68 × A663)×D÷m
叶绿素总含量(mg/g 鲜重)=(20.21× A645 +8.02 × A663)×V提×D÷m÷1000= 0.01×(20.21× A645 +8.02 × A663)×D÷m
V提:提取液体积,10mL;D:稀释倍数;m:样本质量,g
注意事项:
1. 叶绿素对光敏感,研磨和提取等操作尽量避光或者在弱光下进行。
2. 一定要浸提至组织残渣完全变白,否则提取不充分。
3. 用提取液冲洗研钵一定要冲洗至所有的绿色物质被转移至玻璃试管。
4. 测定时吸光值超过1,可进行适当稀释。