编号	成分	规格
试剂一	PCR MagicMix 3.0	1 mL（红盖）
试剂二	超纯水	1 mL（亮黄色）
试剂三	环孢子虫 PCR 引物混合液	100 μL（白盖）
试剂四	环孢子虫 PCR 阳性对照（1×10E8 /μL）	50 μL（黄盖）
试剂五	使用手册	1 份

运输及保存：

低温运输，-20℃保存，保存期限为一年。阳性对照需要单独放置，不要污染其他试剂。

自备试剂：

样品DNA。

使用方法

一、样品 DNA 的制备：

1. 用自选方法纯化N+2个样品的DNA，本试剂盒跟市场上大多数核酸提取试剂盒兼容。可以选用本公司柱式病毒 DNAout。

2. 如果有N个样品，则需要做N+2个提取，包括一个样品制备阳性对照和一个样品制备阴性对照。样品制备阳性对照是在适量水（取决于试剂盒要求的样品起始量）中加 10μL 环孢子虫PCR 阳性对照的 1000 倍稀释液而得，样品制备阴性对照是直接用水。提取结束后后得到模板 DNA 放冰上待用。

二、设置 PCR 反应（40μL 体系）：

3. 对N+2个样品，在PCR时需要增加一个PCR阳性对照和一个PCR阴性对照，故需要设置N+4个反应。在N+4个PCR管中分别加入下列成分：

成份	N+2 个样品管	PCR 阴性对照	PCR阳性对照
PCR Magic Mix 3.0	各 20μL	20μL	20μL
环孢子虫PCR 引物混合液	各2μL	2μL	2μL
N+2个样品DNA模板	各18μL	－－	－－
PCR 阴性对照（水）	－－	18μL	－－
PCR 阳性对照（环孢子虫PCR阳性对照1000倍稀释液）	－－	－－	18μL

环孢子虫PCR试剂盒

4. 按下表设置 PCR 反应：

过程	温度	时间
预变性	95℃	5 min
PCR 反应35个循环	95℃	30 sec
	55℃	30 sec
	72℃	40 sec
后延伸	72℃	7 min

三、电泳检测：

5. 取 10-20 μL PCR 产物。电泳检测 PCR 产物。本产品提供的 PCR Mix 在扩增结束后可以直接上样，不需要另外再加 loading buffer。PCR 产物阳性对照必须有 551bp 大小的条带出现，阴性对照必须无任何扩增，否则实验无效。对没有扩增产物的样品，可以稀释 10 倍后重复 PCR 扩增以排除 PCR 抑制剂的感染。

PCR检测试剂盒仅用于科研，不能用于临床诊断，不得用于其他用途。

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