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鸽子源性成分染料法荧光定量PCR试剂盒

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价格：￥电议

品牌名称：通蔚生物(进口品牌)型号：原产地：中国大陆发布时间：2023/10/11 14:11:18更新时间：2024/8/2 10:38:55

产品摘要：鸽子源性成分染料法荧光定量PCR试剂盒可用于检测食品或其他材料中是否有鸽的成分。现代食品加工工艺大改变了食材原有的味道、气味、色泽、纹理和质地等特性，因此传统的感官鉴别技术已经无法对食材的真伪进行准确的鉴定。同时部分食材还有致敏性，因此基于基因检测的快速灵敏的食材来源检测技术将对食品监管和安全提供重要的保障。

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详细内容

鸽子源性成分染料法荧光定量PCR试剂盒

产品特点

本试剂盒可用于检测食品或其他材料中是否有鸽的成分。现代食品加工工艺大改变了食材原有的味道、气味、色泽、纹理和质地等特性，因此传统的感官鉴别技术已经无法对食材的真伪进行准确的鉴定。同时部分食材还有致敏性，因此基于基因检测的快速灵敏的食材来源检测技术将对食品监管和安全提供重要的保障。本产品就是为满足这一需求根据 PCR 原理开发的产品，它具有下列特点：

1. 即开即用，用户只需要提供病毒样品。

2. 根据鸽子源性成分保守序列设计的一性引物，与相关病毒无交叉反应。

3. 灵敏度可以达到几百拷贝/反应。

4. 一管式荧光定量 PCR 检测，避免后续污染。

5. 本试剂盒足够 50 次 20μL 反应体系的荧光定量 PCR。

参数规格

编号	成分	规格
试剂一	2×qPCR MagicMix	500 μL（棕色管）
试剂二	荧光 PCR 用模板稀释液	1 mL（黄盖）
试剂三	鸽子源性成分染料法PCR 引物混合液	100 μL（白盖）
试剂四	鸽子源性成分染料法PCR 阳性对照(1×10E8 /μL)	50 μL（红盖）
试剂五	DNA 病毒裂解液（试用装）	15 次（9 mL）
	使用手册	1 份

运输及保存：

低温运输、-20℃保存，有效期一年。

自备试剂：

DNA模板、10×ROX(根据机型决定，具体见使用方法)。

使用方法

一、稀释PCR阳性对照(以10E2-10E7拷贝/μL这6个10倍稀释度为例)：

1. 注意：由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分）。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供活体样品做阳性对照，只提供可以直接使用的 DNA 片段作为阳性对照。

2. 标记 6 个离心管，分别为 7，6，5，4，3，2。

3. 用带芯枪头分别加入 45 μL 荧光 PCR 用模板稀释液（好用带芯枪头，下同）。

4. 在 7 号管中加入 5 μL 1×10E8 拷贝/μL 的阳性对照，充分震荡 1 分钟，得1×10E7 拷贝/μL 的阳性对照。放冰上待用。

5. 换枪头，在 6 号管中加入 5 μL 1×10E7 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡 1 分钟，得 1×10E6 拷贝/μL 的阳性对照。放冰上待用。

6. 换枪头，在 5 号管中加入 5 μL 1×10E6 拷贝/μL 的阳性对照到 5 号管中，充分震荡 1 分钟，得 1×10E5 拷贝/μL 的阳性对照。放冰上待用。

7. 重复上面的操作直到得到 6 个稀释度的阳性对照。放冰上待用。

二、样品DNA的制备：

8. 如果有 N 个样品，必须设置 N+2 个提取，多出的一个是 PC（样品制备阳性对照），一个是 NC（样品制备阴性对照）。可以用 10μL 上步制备的 PCR 阳性对照的第 4号（浓度为 1×10E4 拷贝/μL，10μL 相当于 1 万拷贝）或第 5 号（浓度为 1×10E5拷贝/μL，10μL 相当于 10 万拷贝）再加上一定量的水使总体积跟每次制备要求的体积一样，以此作为 PC。另外用水作为 NC。如果每次制备需要 200μL 样品，则 PC 和 NC 的体积也必须是 200μL。

9. 用自选方法纯化样品的 DNA，本试剂盒跟市场上大多数病毒 DNA 提取试剂盒兼容。也可以选购本公司的一管式病毒 DNAout 或其升版柱式病毒 DNAout。本试剂盒免费赠送 15 次一管式病毒DNAout。

三、设置qPCR反应(20μL体系，在样品制备室进行)：

10. 如果只做 1 次重复，则标记 N+9 个 PCR 管，其中 N+2 个用于上步得到的 N+2 个样品，1 个用于 PCR 阴性对照，6 个用于 PCR 阳性对照。如果做 2-3 次重复，则反应设置数量相应增加 2 或 3 倍。

11. 在标记管中按下表加入各成分(本表只列出一次重复。样品管和阴性对照设置完毕后才设置阳性对照，并且阳性对照样品要等所有管子盖上盖子储存好后加)：

成分	样品管 N+2个	PCR阴性对照管	PCR阳性对照管(2-7管)
2×qPCR MagicMix(棕色管)	10μL	10μL	各10μL
鸽子源性成分PCR引物混合液(白盖）	2μL	2μL	各2μL
自备10×ROX(见注)	2μL	2μL	各2μL
N+2待测样品DNA模板	6μL	不加	不加
第7步所得PCR阳性对照稀释液(2-7号)	不加	不加	各6μL2号样到2号管,3号样到3号管

注: 仅 ABI7500、7700 和 7900 仪器需要使用 ROX 作为对照，其他荧光 PCR 仪器（如 iCycler IQ、MJ Option、MJ Chromo4、MX3000、MX4000、RotorGene3000、RotorGene 6000 和 LightCycler480）不需要使用 ROX，则用水替代。

12.盖上盖子后上机，按下面参数进行PCR(具体PCR参数可以根据仪器不同而自行优化)。

过程	温度	时间
预变性	92℃	5分钟
PCR反应30个循环	94℃	60
	50℃	60
	72℃	60

13.数据采集

具体操作按所用仪器推荐的流程进行。本产品中所含的荧光染料在不结合DNA时，大吸收光谱在471nm，结合DNA时的大吸收光谱在500nm，大发射光谱在530nm。信号采集可以设置在复性或延伸步骤。

四、数据处理：

14.如果把本试剂盒用于定量检测，则以阳性对照浓度的log值为横轴，以Ct值为纵轴，绘制标准曲线。再以待测样品的Ct值从标准曲线上推算出样品DNA浓度的log值，再推算出其浓度。

15. 如果把本试剂盒用于定性检测，只判断阳性或阴性，则阴性对照Ct必须大于或等于40。阳性对照必须有荧光对数增长，有典型扩增曲线，Ct值应该小于或等于30。对待测样品，如果其Ct大于或等于40则为阴性，如果小于或等于35则为阳性。如果在35-40之间，则重复一次。重复实验的Ct值如果大于或等于40则为阴性，如果小于40，则为阳性。

染料法荧光定量PCR试剂盒仅用于科研，不能用于临床诊断，鸽子源性成分染料法荧光定量PCR试剂盒不得用于其他用途。

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