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柱式动物线粒体DNA提取试剂盒，PCR(柱式动物线粒体DNAout)
价格：￥电议
品牌名称：$brandModel.Title(进口品牌)型号： 原产地：中国大陆 发布时间：2023/10/12 14:42:59更新时间：2024/8/2 10:38:55
产品摘要：柱式动物线粒体DNA提取试剂盒，PCR(柱式动物线粒体DNAout)是进行分子进化研究和母性遗传研究的重要材料， 但传统的两步式 mtDNA 提取方法是先温和裂解细胞，分离线粒体，然后再从 线粒体中提取 mtDNA。此方法中的温和裂解细胞的条件十分难以控制，需要 针对不同组织材料单独进行优化。
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详细内容
柱式动物线粒体DNA提取试剂盒，PCR(柱式动物线粒体DNAout)
线粒体 DNA（mtDNA）是进行分子进化研究和母性遗传研究的重要材料， 但传统的两步式 mtDNA 提取方法是先温和裂解细胞，分离线粒体，然后再从 线粒体中提取 mtDNA。此方法中的温和裂解细胞的条件十分难以控制，需要 针对不同组织材料单独进行优化。本方法克服了上述缺点，具有下列优点：
1. 不需要单独纯化线粒体，柱式法纯化，操作简单快捷。
2. 得到的mtDNA可以直接用于PCR。
3. 每 107个动物细胞一般能得到100ng 左右的 mtDNA，每克组织一般能得 到 3-5ug mtDNA。
4. 注意：本产品只适合于动物材料，不适合于植物材料，因为植物线粒体DNA 一般都十分巨大，非常难提。
| 成份 | 大扁盒包装 |
| 柱式动物线粒体DNA提取溶液A | 13 mL |
| 柱式动物线粒体DNA提取溶液B | 13 mL |
| 柱式动物线粒体DNA提取溶液C | 18 mL |
| 离心吸附柱 | .50套 |
| 通用洗柱液. | 50mL. |
| DNA洗脱液 | 10mL. |
| 使用手册 | 1份 |
运输及保存：
常温运输，短期可以在室温放置；长期保存好放4℃。
常温运输，短期可以在室温放置；长期保存好放4℃。
自备试剂 ：
无
无
1. 用自备的0.25%胰酶消化液处理约107个培养细胞，离心收集后弃上清。
2. 用PBS或TBS等缓冲液洗涤细胞两次，离心得到的细胞沉淀直接用于 mtDNA提取。
二：组织细胞预处理
二：组织细胞预处理
3. 用剪刀将1g新鲜的动物组织剪碎（芝麻大小好），转移到1.5mL塑料 离心管中，用于mtDNA提取。注意：好不要使用冻存的动物组织，因 为冻凝过程中形成的冰晶会将线粒体刺破，使其DNA释放出来被胞浆中的DNA酶降解，影响回收率。
三：血液预处理
三：血液预处理
4. 将3-5 mL抗凝外周血静置30分钟或低速离心5分钟，取白细胞层。
5. 用自备 PBS 洗涤白细胞两次，得到的白细胞沉淀用于mtDNA提取。
四：mtDNA提取
5. 在细胞沉淀或剪碎的组织中加入250 uL冰浴的溶液
A，充分吹打分散。 如果是剪碎的组织，不要等成块的组织溶解即可继续下步操作。
四：mtDNA提取
5. 在细胞沉淀或剪碎的组织中加入250 uL冰浴的溶液
A，充分吹打分散。 如果是剪碎的组织，不要等成块的组织溶解即可继续下步操作。
6. 加入250 uL常温的溶液B（如果溶液B有沉淀，用须37℃加热溶解 后冷却到室温方可使用），温和反复颠倒混匀10次。千万不要剧烈振荡。
7. 冰上放置6-8分钟。注意不要超过8分钟。
8. 加入350uL冰浴的溶液 C，温和混匀4-6次，可见白色沉淀物产生，然 后放冰上放置20-25分钟。
9. 室温12000-15000 g 离心10分钟，小心将上清液转移到离心吸附柱中。 由于此时的溶液比重较大，有时候出现沉淀漂浮是正常现象，取上清时避 开漂浮的沉淀即可。
10. 静置5分钟以让DNA与离心吸附柱充分结合，此步十分重要。
11. 室温12000-15000g离心1分钟，弃收集管中的废液。
12. 加入500 uL的通用洗柱液，室温 12000-15000g离心1分钟，弃收集 管中废液。
注意：通用洗柱液中含乙醇，用后需要将盖拧紧存放，否则乙 醇会挥发。
注意：通用洗柱液中含乙醇，用后需要将盖拧紧存放，否则乙 醇会挥发。
13. 重复上步1次。
14. 室温12000-15000g离心1分钟，甩干残留液体。此步不能省略，否则 残留乙醇会影响DNA的后续使用（如DNA上样时不能沉淀到加样孔中）。
15. 将离心吸附柱置于一个新的1.5 mL塑料离心管中，加入30-50uL 65-80℃预热的DNA洗脱液，室温放置 2 分钟。常温的 DNA 洗脱液也可 以用于洗脱，但产量稍微有所降低。
16. 室温12000-15000g 离心1分钟，离心管底溶液即mtDNA。
17. 由于本公司离心吸附柱结合DNA能力较强，如果再加30-50uL DNA 洗 脱液到离心吸附柱中，往往还能洗脱下很多mtDNA（相当于次洗脱 的 20-30%），但注意不要使用上步得到的mtDNA 溶液来洗脱。
18. 12000-15000g离心1分钟，离心管底溶液即线粒体 DNA。每107个动 物细胞一般能得到100ng左右的mtDNA，每克组织一般能得到 3-5ug mtDNA。如果 DNA 需要浓缩，可以使用本公司的核酸浓缩剂。
19. 由于DNA机械断裂，电泳时DNA可能不呈现一的带，但此mtDNA溶液可以直接用于PCR。
柱式动物线粒体DNA提取试剂盒，PCR(柱式动物线粒体DNAout)仅用于科研，不能用于临床诊断！所有产品仅供科研使用，不得用于其他用途。
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