一管式病毒DNA提取试剂盒(一管式病毒DNAout)本产品是门用于从血清(血浆)等液体样品中提取病毒(如HBV)DNA 的产品,其原理是异硫氰酸胍/LiCl 溶液即能裂解病毒,又能沉淀DNA。本产品灵敏度高,稳定性好,使用简单快捷,尤其适合于整合到PCR检测试剂盒中。
1. 回收率高,可以达到90%以上,高于绝大部分基于离心柱的提取方法。
2. 灵敏度高,通过PCR检测到的终灵敏度可以达到30-50拷贝/mL。
3. 一管式操作,不使用离心柱,整个操作过程均在室温下完成。
4. 安全无毒,不需要使用苯酚和等有机溶液。
5. 处理量大,如果加上病毒离心富集步骤,多可以处理1.5 mL液体病毒样品。
6. 与PCR和荧光PCR兼容。
7. 本产品只能用于科研,不能用于临床。
成份 | 塑料袋包装 |
DNA病毒溶液 | 30mL |
使用手册 | 1份 |
运输及保存 :
常温运输及保存,有效期一年。
自备试剂:
异丙醇,70%乙醇
1.在1.5 mL螺旋盖塑料离心管(不要使用压盖式塑料离心管)中加入 0.2 mL液体样品(血清、血浆、尿液、脑脊液、唾液、眼泪等等)。
1.1、 如果是口腔拭子、咽喉拭子等各种拭子样品,则将拭子放 0.2mL自备生理盐水中挤压出液体,然后取0.2mL进行DNA提取。
1.2、 如果是粪便等半固定样品,则取约0.3mL的样品,加入0,3自备生理盐水,震荡重悬,离心取0.2mL上清进行DNA提取。
1.3、 如果血液,细胞培养液等含细胞的液体,可以离心用上清,也可以直接取用,但后者提取的DNA中有细胞的基因组DNA。
1.4、 如果样品是实体组织或培养细胞,则需要在自备生理盐水中匀浆后离 心,用0.2mL上清液(含病毒)进行DNA提取,但此种情况下后得到的DNA不可避免的会含有基因组DNA。
1.5、 如果液体样品中的病毒需要富集,可以使用1.5 mL上述方法得到的 液体在4℃ 24,000 g冷冻离心60分钟, 移弃1.3 mL、用剩下的 0.2mL继续操作。
2. 在0.2mL样品中加入0.6mL DNA病毒裂解液,振荡30混匀后室温放置10分钟。
3. 振荡30混匀后加入0.7 mL自备的异丙醇,振荡30混匀后,15,000 g室温离心15分钟。
4. 移弃上清,注意不要触及管底的DNA沉淀,加入1.0 mL 70%乙醇,振荡数后15,000 g室温离心5分钟。
5. 移弃上清,注意不要触及管底的DNA沉淀。再短暂离心数, 移弃残留液体(残留的乙醇会影响后续反应)。如果此时离心面的管壁上有可见的膜状沉淀,属于正常现象(常见于血清血浆样品)。加入20uL核酸样品稀释液,用移液枪仔细吹打离心管管底和管壁的膜状沉淀,使其溶解。溶解液混浊或有少量不溶物是正常现象。不要离心只取上清使用,因为不溶沉淀物中含有DNA,必须取混合液使用(哪怕很浑浊)。
6. 样品可以直接取适量用于PCR,也可保存于-20℃长期保存。
注:病毒提取的核酸量远不足以电泳检测,提取后可通过PCR检测,灵敏度可以达到30-50拷贝/mL。
使用效果:
一管式病毒DNA提取试剂盒(一管式病毒DNAout)仅用于科研,不能用于临床诊断!所有产品仅供科研使用,不得用于其他用途。