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柱式无内毒素质粒DNA提取试剂盒(柱式无内毒素质粒DNAout)
价格：￥电议
品牌名称：通蔚生物(进口品牌)型号： 原产地：中国大陆 发布时间：2023/10/12 15:22:19更新时间：2024/8/2 10:38:55
产品摘要：柱式无内毒素质粒DNA提取试剂盒(柱式无内毒素质粒DNAout)是整合柱式质粒DNAout和菌体内毒素清除剂两产品而成。菌体内毒素清除剂是独家推出的产品，在质粒提取就把细胞壁上的内毒素清除掉，彻底避免了目通用的先提取DNA+内毒素混合物， 再从中纯化质粒DNA的弊端。用本产品提取的质粒DNA，内毒素的污染浓度低，适合于转染等对内毒素的污染敏感的实验。
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详细内容
柱式无内毒素质粒DNA提取试剂盒(柱式无内毒素质粒DNAout)
本产品是整合柱式质粒DNAout和菌体内毒素清除剂两产品而成。菌体内毒素清除剂是独家推出的产品，在质粒提取就把细胞壁上的内毒素清除掉，彻底避免了目通用的先提取DNA+内毒素混合物， 再从中纯化质粒DNA的弊端。用本产品提取的质粒DNA，内毒素的污染浓度低，适合于转染等对内毒素的污染敏感的实验。
1.操作简单，只在经典的柱式质粒DNA提取，增加菌体内毒素清除一步。
2.去内毒素效果好，处理一次可以去除99%以上的内毒素。
3.质粒丢失少，产率只比柱式质粒DNAout低 5-10%，效果好于先提质粒DNA，再用液相内毒素清除剂处理的方法。
4. DNA可以直接用于转染等实验。
| 成份 | 大纸盒包装 |
| 菌体肉毒素清除剂 | 200mL |
| 柱式质粒DNAout溶液A | 13mL |
| 柱式质粒DNAout溶液A | 13mL |
| 柱式质粒DNAout溶液A | 18mL |
| RNaseA（10mg/mL） | 0.3mL |
| 离心吸附柱 | 50套 |
| 通用洗柱液 | 50mL |
| DNA洗脱液2.0 | 10mL |
| 使用手册 | 1份 |
运输及保存：
常温运输及保存，有效期一年。RNase A（10mg/mL）收到样品后需要低温保存。
常温运输及保存，有效期一年。RNase A（10mg/mL）收到样品后需要低温保存。
自备试剂：
菌液
菌液
一: 用菌体内毒素清除剂清除E.coli细胞壁上的内毒素。
1. 收集1.5-5 mL E.coli 饱和菌液，12,000 rpm离心1分钟，弃上清，得到细菌沉淀。
2. 加入1 mL菌体内毒素清除剂温和混匀后10,000-12,000 rpm离心 1
分钟，弃上清（含内毒素）。
3. 一次洗涤（1-2 步）可以去掉90%以上的内毒素，如果需要，可以再重复上述洗涤操作步骤3次，得到的菌体可以直接进入后续的质粒 DNA提取步骤。
二：从无内毒素的E.coli中提取质粒DNA
4. 先将全部RNase A溶液全部加入到柱式质粒DNAout溶液A中，摇匀后再取用，未用完的柱式质粒DNAout 溶液A好在4℃保存。
5. 在第3步所得菌液中加入250 uL柱式质粒DNAout溶液A，用枪头充分吹打使菌体重悬（此步在冰上操作效果更佳）。
注意：细胞未充分悬浮会影响后续操作，可以使用漩涡振荡器帮助混匀或使用Tip吸头吹打沉淀至完全混匀。
6. 加入250 uL柱式质粒 DNAout 溶液B（如果溶液B有沉淀，用须37℃加热溶解后冷却到室温方可使用），温和反复颠倒混匀4-6 次，看到溶液变粘即可，然后冰上放置不超过4-5分钟。
注意：此步处理不能超过5分钟，否则DNA的碱损伤比较严重。同时千万不要剧烈振荡，否则基因组DNA断裂产生的片段非常容易污染质粒DNA。溶液B用后
需要将盖拧紧存放，否则空气中的二氧化碳会进入溶液，形成碳酸，中和溶液B中的NaOH，降低其效率）。
7. 加入350uL冰上预冷的柱式质粒DNAout溶液C，反复颠倒混匀4-6次，可见白色沉淀物产生，然后冰上放置至少5 分钟。
8. 高转速（12,000 rpm 以上）4℃离心5分钟，小心将上清液转移到离心吸附柱中。由于此时的溶液比重较大，有时候出现沉淀漂浮是正常现象，取上清时避开漂浮的沉淀即可。如果此步的离心在室温进行，更容易出现沉淀物漂浮的现象。
9. 静置2分钟以让质粒DNA与吸附柱充分结合，此步十分重要。
10. 室温12,000rpm离心1分钟，弃收集管中的废液。
11. 加入500 uL的通用洗柱液，室温12,000rpm离心1分钟，弃收集管中废液。注意：通用洗柱液中含乙醇，用后需要将盖拧紧存放，否则乙醇会挥发。
12. 重复上步1次。
13. 室温12,000rpm 离心1分钟，甩干残留液体。此步不能省略，否则残留乙醇会影响 DNA 的后续使用（如DNA上样时不能沉淀到加样孔中）。
14. 将离心吸附柱置于一个新的1.5 mL塑料离心管（自备）中，加入30-100uL 65-80℃预热的DNA洗脱液 2.0，室温放置2分钟。常温的DNA洗脱液2.0也可以用于洗脱，但产量稍微有所降低。
15. 室温12,000rpm离心1分钟，离心管底溶液即质粒DNA。
1. 由于吸附柱结合DNA能力较强，如果再加适量DNA洗脱液2.0到离心吸附柱中，往往还能洗脱下很多质粒DNA（相当于洗脱的 20-30%），但注意不要使用上步得到的DNA洗脱液2.0来洗脱。
1. 由于吸附柱结合DNA能力较强，如果再加适量DNA洗脱液2.0到离心吸附柱中，往往还能洗脱下很多质粒DNA（相当于洗脱的 20-30%），但注意不要使用上步得到的DNA洗脱液2.0来洗脱。
柱式无内毒素质粒DNA提取试剂盒(柱式无内毒素质粒DNAout)仅用于科研，不能用于临床诊断！所有产品仅供科研使用，不得用于其他用途。
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