当前位置： 易推广 > 生物试剂/抗体/细胞 > 生物制剂 > PCR检测试剂盒 > 上海通蔚实业有限公司 > 产品展示 > PCR试剂盒 > DNA提取试剂盒 > 革兰氏阳性细菌质粒DNA提取试剂盒(革兰氏阳性细菌质粒DNAout)
革兰氏阳性细菌质粒DNA提取试剂盒(革兰氏阳性细菌质粒DNAout)
价格：￥电议
品牌名称：通蔚生物(进口品牌)型号： 原产地：中国大陆 发布时间：2023/10/12 16:01:48更新时间：2024/8/2 10:38:55
产品摘要：革兰氏阳性细菌质粒DNA提取试剂盒(革兰氏阳性细菌质粒DNAout）是用于从革氏阳性（G+）细菌种小量制备质粒DNA。本产品基于改良后的碱变性法，先菌体经溶菌酶破壁，然后碱裂解法处理使基因组DNA和质粒DNA均变性，再用酸中和，质粒DNA客户快速复性，而基因组DNA不能快速复性，故可以通过离心去除，除去后含质粒的上清用离心吸附柱吸附质粒 DNA，洗去杂质，即可得到纯化的质粒DNA。
产品完善度： 访问次数：162
企业档案
会员类型：初级版会员
已获得易推广信誉 等级评定
10成长值
(0 -40)基础信誉积累，可浏览访问
(41-90)良好信誉积累，可接洽商谈
(91+ )优质信誉积累，可持续信赖
易推广初级版会员：3年
工商认证 【已认证】
最后认证时间：
注册号： 【已认证】
法人代表： 【已认证】
企业类型：经销商 【已认证】
注册资金：人民币万 【已认证】
产品数：14478
参观次数：1179478
详细内容
革兰氏阳性细菌质粒DNA提取试剂盒(革兰氏阳性细菌质粒DNAout)
本试剂盒是用于从革氏阳性（G+）细菌种小量制备质粒DNA。本产品基于改良后的碱变性法，先菌体经溶菌酶破壁，然后碱裂解法处理使基因组DNA和质粒DNA均变性，再用酸中和，质粒DNA客户快速复性，而基因组DNA不能快速复性，故可以通过离心去除，除去后含质粒的上清用离心吸附柱吸附质粒 DNA，洗去杂质，即可得到纯化的质粒DNA。本产品具有下列特点：
1. 快速、步骤少，整个操作在40分钟左右完成。
2. 不需要预平衡离心吸附柱。
3. 通用洗柱液即开即用，不需要用户额外加乙醇。
4. 溶液B中有蓝色染料，便于目测非常关键的碱变性和中和反应两步的溶液混匀状况，保证实验效果。
5. 产量高，一次可以处理1-4 mL过夜培养的G+菌液，每毫升过夜培养的G+细菌可以提取到2-5ug/mL（取决于质粒是拷贝、中拷贝还是低拷贝）。
6. 纯度高，采用本试剂盒提取的质粒OD比值在1.8-2.0之间，可以直接用于酶切、转化、测序及PCR 等。
| 成份 | 大纸盒包装 |
| 革氏阳性质粒DNAout溶液A | 13 mL |
| 革氏阳性质粒DNAout溶液B | 13 mL |
| 革氏阳性质粒DNAout溶液C | 18 mL |
| 溶菌酶干粉(20KU/mg) | 30mg(黄盖) |
| RNase A溶液, 10mg/ mL | 0.6 mL |
| 通用洗柱液 | 50 mL |
| DNA洗脱液2.0 | 10 mL |
| DNA洗脱液2.0 | 50套 |
| 使用手册 | 1份 |
运输及保存：
常温运输和保存，RNase A溶液需要-20℃保存，有效期一年。
常温运输和保存，RNase A溶液需要-20℃保存，有效期一年。
自备试剂：
无
无
使用方法
1. 从筛选平板上挑取单菌落至含抗生素的培养基中，37℃震荡培养 12-16小时（摇床转速 200-300）。注意：建议使用LB培养基，营养更丰富的培养基会使菌体浓度过高，超过纯化系统处理能力而降低DNA质量。另外，延长培养时间会因细胞死亡、裂解而造成质粒DNA浓度降低。
1. 从筛选平板上挑取单菌落至含抗生素的培养基中，37℃震荡培养 12-16小时（摇床转速 200-300）。注意：建议使用LB培养基，营养更丰富的培养基会使菌体浓度过高，超过纯化系统处理能力而降低DNA质量。另外，延长培养时间会因细胞死亡、裂解而造成质粒DNA浓度降低。
2. 用1.5 mL离心管收集1-4 mL过夜培养饱和菌液，室温12,000rpm离心1分钟，弃上清，再短暂离心，吸弃残留液体。
3. 使用本试剂盒时，先将全部RNase A溶液全部加入到革氏阳性质粒DNAout溶液A（简称溶液 A，下同）中，摇匀后再取用，未用完的溶液A放 4℃保存。
4. 加入250uL溶液A，用枪头充分吹打使菌体重悬。
注意：细胞未充分悬浮会影响后续碱变性，可以使用漩涡振荡器混匀或使用枪头吸头吹打沉淀至完全混匀。
5. 加入大约5mg溶菌酶干粉（用0.1mg精度的分析天平称量），轻柔颠倒混匀后室温放置10分钟破裂细胞壁。
6. 加入25 uL革氏阳性质粒DNAout溶液B（下面简称溶液B，如果溶液B在低温放置产生沉淀，须37℃加热溶解后冷到室温方可使用），温和反复颠倒混匀看到溶液的蓝色变得均匀并且溶液变粘即可（一般需要颠倒4-6次），然后冰上放置超过5分钟。
注意：冰上放置不要超过 5分钟，否则质粒DNA会有碱损伤。千万不要剧烈振荡，否则基因组DNA断裂产生片段非常容易污染质粒DNA。溶液B用后需要将盖拧紧存放，否则空气中的二氧化碳会进入溶液，形成碳酸，中和溶液B中的碱，降低其效率。如果溶液B颜色不是蓝色，则表示变质，应该弃之不用并且速跟厂家联系。
7. 加入 350 uL 冰上预冷的革氏阳性质粒DNAout溶液C（下面简称溶液C），温和反复颠倒直到溶液颜色变成无色（一般需要颠倒混匀4-6次）。混匀后可见白色沉淀物产生，然后冰上放置至少5分钟让质粒DNA复性。
8. 12,000rpm离心3分钟，小心将上清液转移到离心吸附柱中。由于此时的溶液比重较大，部分沉淀物悬浮在上清液中属正常，吸取上清时避开漂浮的沉淀物即可。如果此步的离心在4℃进行，可减轻沉淀物漂浮。
9. 静置2分钟以让质粒DNA与离心吸附柱充分结合，保证静置不少于2分钟十分重要。
10. 室温12,000rpm离心1分钟，弃收集管中的废液。
11. 加入500 uL的通用洗柱液到离心吸附柱中，室温12,000rpm离心1分钟，弃收集管中废液。注意：通用洗柱液中含乙醇，每次用后需要将盖拧紧存放，否则乙醇会挥发。
12. 重复上步1次。
13. 室温12,000rpm离心1分钟，甩干残留液体。此步不能省略，否则残留乙醇会影响DNA的后续使用（如残留乙醇使DNA溶液在电泳上样时不能沉淀到加样孔中）。
14. 将离心吸附柱置于一个新的1.5 mL塑料离心管（自备）中，加入30-100 uL65-80℃预热的DNA洗脱液2.0，室温放置2分钟。常温的DNA洗脱液2.0也可以用于洗脱，但产量稍微有所降低。
15. 室温12,000rpm离心1分钟，离心管底溶液即质粒DNA。
16. 由于因的吸附柱结合DNA能力较强，如果再加适量DNA洗脱液2.0 到离心吸附柱中，往往还能洗脱下很多质粒DNA（相当于洗脱的20-30%），但注意不要使用上步得到的DNA洗脱液2.0来洗脱。
革兰氏阳性细菌质粒DNA提取试剂盒(革兰氏阳性细菌质粒DNAout)仅用于科研，不能用于临床诊断！所有产品仅供科研使用，不得用于其他用途。
在线咨询