30min植物基因组DNA提取试剂盒
描述:
该试剂盒采用独特的裂解液,可快速可靠的从多糖、多酚含量较高的植物组织样品中纯化出高纯度的DNA。应用本试剂盒提取的DNA可直接用于限制性酶切反应、PCR、文库构建、Southern 杂交等多种分子生物学实验。
(1) 本试剂盒中的Washing Buffer中已经加乙醇,无需单独添加。
(2)蛋白酶K和Rnase A长期保存请储存于-20℃,短期室温保存(6 个月),其它组分储存于室温。
(3)Plant AP2含有CTAB,室温储存会出现白色沉淀,使用放置于56℃水浴锅中溶解后使用。
(4)自备试剂:
(1)样本组织悬液制备
研钵研磨法:在1.5 ml EP管中加入600μl的Plant AP1 裂解液,并在管盖上加入5μl的Rnase A。将研磨后的植物组织(干重40~60 mg,湿重150 mg)加入到 Plant AP1裂解液中,漩涡震荡混合15s。
钢珠研磨法:在研磨EP管中加入700μl的Plant AP1 裂解液,加入植物组织(干重 50~80 mg,湿重200 mg),并加入钢珠进行研磨,研磨完毕后,取600 μl 的组织悬液到新的1.5 ml EP管中,并在管盖上加入5μl的Rnase A。
(2)向上述组织悬液中加入250μl Plant AP2 裂解液,漩涡混合15s,56℃水浴锅(或室温)静置5min,以消化RNA。
(3)向上述溶液中加入20μl 蛋白酶 K,漩涡混合10s,于56℃水浴锅(或室温)中消化 5~15min。
(4)13,000rpm 离心 5min,吸取600 μl 上清到新的1.5mlEP 管中,并加入 500μl 的漩涡混合 15s。
(5)13,000rpm 离心 2min,溶液将分为无色上层水相(DNA)、中间层(蛋白)和绿色下层油相(酚类)。
(6)吸取400μl上层无色上清液到新的1.5 ml EP 管中,并加入450μl的Plant LB3溶液,漩涡10s后,倒入到吸附柱中,13,000rpm离心 1min。
(7)倒掉废液。向吸附柱中加入500μl Washing Buffer,13,000rpm离心15s。重复此步骤一次。
(8)将吸附柱重新放回离心机,13000rpm空离心2min,将残留的乙醇彻底甩干。
(9)将吸附柱芯放入到1.5 ml收集管中,向吸附柱芯中加入60~150μl DNA Elution Buffer,室温放置1min,13,000rpm离心1min,洗脱液即为基因组 DNA,冷冻保存。
30min植物基因组DNA提取试剂盒仅用于科研,不能用于临床诊断!所有产品仅供科研使用,不得用于其他用途。