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上海通蔚实业有限公司 主营产品：人白介素试剂盒＿大鼠白介素试剂盒＿小鼠白介素试剂盒_鸡白介素试剂盒_牛白介素试剂盒＿猪白介素试剂盒＿羊白介素试剂盒＿犬白介素试剂盒＿兔白介素试剂盒＿猴白介素试剂盒＿豚鼠白介素试剂盒＿仓鼠白介素试剂盒＿鱼白介素试剂盒

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动物组织/细胞总RNA提取试剂盒(双柱型)

动物组织/细胞总RNA提取试剂盒(双柱型)

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价格：￥电议

品牌名称：通蔚生物(进口品牌)型号： 原产地：中国大陆 发布时间：2023/10/16 14:27:05更新时间：2024/8/2 10:39:08

产品摘要：动物组织/细胞总RNA提取试剂盒(双柱型)可从≤30 mg动物软组织(肝脏、脾脏、肾脏，脑等) 、≤1×107个培养细胞中快速提取总RNA。试剂盒基于硅胶柱纯化技术，提取过程中无需使用酚β-巯基乙醇，整个提取过程可在 25 min 内完成。

产品完善度： 访问次数：353

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手机网站：http://m.yituig.com/c162640/

商铺地址：http://www.tw-reagent.com

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生化检测试剂盒

PCR试剂盒

白介素ELISA试剂盒

代理品牌

自主品牌

详细内容

动物组织/细胞总RNA提取试剂盒(双柱型)
产品组成：

组分

规格（50 次）

裂解液 RL（Buffer RL）

50 mL

去蛋白液 RW（Buffer RW）

50 mL

漂洗液 RW1（Buffer RW1）

20 mL

无 RNA 酶双蒸水（RNase-Free ddH2O）

10 mL

消泡剂 DM（Reagent DM）

550 µL

RNase-Free FlaPure RNA Columns

50 个

RNase-Free FlaPure gDNA Remove Columns

50 个

收集管（Collection Tubes（2.0 mL））

100 个
保存条件：常温（10~25℃）保存18个月。
本试剂盒可从≤30 mg动物软组织(肝脏、脾脏、肾脏，脑等) 、≤1×107个培养细胞中快速提取总RNA。试剂盒基于硅胶柱纯化技术，提取过程中无需使用酚 β-巯基乙醇，整个提取过程可在 25 min 内完成。试剂盒结合DNA过滤技术，可高效地过滤去除基因组DNA，提取的总RNA 纯度高，无蛋白和其它杂质的污染，可用于RT-PCR、Northern Blot、Poly A 纯化、RNase保护分析和体外翻译等实验。
操作简便：25 min内完成数个样品的总RNA提取；
高效去除基因组DNA：独特的基因组DNA过滤柱，无需DNase处理；
安全低毒：无需酚及β-巯基乙醇等有毒试剂；
RNA纯度高：提取的RNA无杂质残留，适用于对纯度、完整性要求很高的下游实验。
1. 使用应在漂洗液RW1中加入4倍体积的无水乙醇；
2. （可选）Reagent DM（消泡剂）: 每1mL Buffer RL 加入5µLReagent DM（现用现配，可用枪头蘸取芝麻大小Reagent DM于离心管壁），Reagent DM 能高效消除匀浆过程产生的泡沫；
3. 使用无RNase的塑料制品和枪头避免交叉污染，经常更换新手套。因为皮肤经常带有细菌、汗液及RNase等，可能导致RNA降解；
4. RNA 在裂解液RL中时不会被RNase降解。但提取后继续处理过程中应使用不含 RNase 的塑料和玻璃器皿。玻璃器皿可在150℃烘烤4h，塑料器皿可在 0.5 M NaOH中浸泡10min，然后用水彻底清洗、灭菌；
5. 配制溶液如 50%、70%乙醇应使用 RNase-Free ddH2O（将水加入干净的玻璃瓶中，加DEPC至终浓度为 0.1%(V/V)，混匀放置过夜后高压灭菌）。
一、从动物组织中提取总RNA
本产品可处理≤30mg动物组织，正确组织取样量是获得理想产量和纯度的关键。肝脏1~20mg，脾脏/胸胰小于10mg。初次使用时，推荐动物组织量为 10~15mg，根据结果再调整用量。处理肌纤维样品(肌肉/皮肤/心脏)，需另外订购Proteinase K(20 mg/mL)。样品可用液氮研磨、机械/玻璃匀浆器等工具进行匀浆。
1.取组织样品，加入500~750µL BufferRL，用合适工具进行匀浆，室温静置 3~5 min；

组织量

裂解液 RL

＜10 mg 动物组织

500 µL

≥10 mg 动物组织

750 µL
注意：若样品为≤30 mg 的难裂解组织(肌肉/皮肤/心脏)，用500~700 µL Buffer RL 匀浆肌肉类组织样本。取500µL匀浆液，加入250µL RNase-Free ddH2O 和 20 µL Proteinase K(需另外订购), 颠倒混匀，55℃孵育15 min。
2. 14,000×g 离心5min，按第3步进行操作；
二、从培养细胞中提取总RNA
本产品单次可处理102~107个细胞。初次使用时，建议使用2~5×106个细胞。根据结果再调整细胞量。但不论何种情况，细胞量不要超过1×107。
1. 加入适量的 Buffer RL 至细胞样品中，打散细胞；
a. 悬浮细胞：离心收集的细胞，弹打或涡旋松散细胞沉淀，加入适量BufferRL，涡旋或用移液枪吸打打散细胞。

细胞量

裂解液 RL

＜5×106个细胞

400 µL

≥5×106个细胞

750 µL
b. 贴壁细胞：彻底吸弃培养液，向培养瓶或培养皿中加入适量的 Buffer RL。用移液枪吹打使细胞从壁上脱落，转移至 1.5 mL RNase-Free 离心管中。

径培养皿直

裂解液 RL

＜6 cm

400 µL

6~10 cm

750 µL
2. 用注射器或移液枪吹打裂解液5~10次打断DNA，按第3步进行操作；
注意：样品量过多，裂解不充分会导致裂解液粘稠，堵塞gDNA过滤柱，如果裂解液非常粘稠可适当增加裂解液用量。
3. 把RNase-Free FlaPure gDNA Remove Column 放在2 mL收集管中，把细胞裂解液或组织上清液转移至gDNA过滤柱中，14,000×g离心2 min；
注意：组织裂解液需高速离心去除杂质，细胞碎片会引起柱子的堵塞。处理某些样品时，离心后裂解液表面还可能会有一层脂类层，转移上清液尽量不要吸到这些物质。若gDNA过滤柱堵塞，可将滤液吸出加入适量裂解液匀浆后再转移至新的gDNA过滤柱中。
4. 丢弃gDNA过滤柱，加入等倍体积70%乙醇至滤液中，用移液枪吸打3~5 次；
注意：处理肝脏和脾脏时，用50%乙醇代替70%乙醇可以提高产量。若想更方便可以用Buffer RW1代替70%乙醇。
5. 把 RNase-Free FlaPure RNA Column 放在2mL收集管中，转移≤750 µL 混合液至吸附柱中。12,000×g 离心30~60 s，倒掉收集管中的废液，把吸附柱放回收集管中；
6. (可选：若混合液超过750 µL) 转移剩余的混合液至吸附柱，12,000×g离心 30~60 s，倒掉收集管中的废液，把吸附柱放回收集管中；
7.加入500 µLBuffer RW 至吸附柱上，12,000×g 离心30~60 s，倒掉收集管中的废液，把吸附柱放回收集管中；
注意：gDNA 过滤柱可去除95~99%的DNA污染，若后续实验对RNA纯度比较严格，可选择使用DNase I（需另外订购）进行膜上DNase消化。
8. 加入500µLBuffer RW1至吸附柱中，12,000×g离心30~60 s，倒掉废液，把吸附柱放回收集管中；
9. 重复步骤 8；
10. 12,000×g离心2min，倒掉废液，将吸附柱置于室温放置数分钟，以彻底晾干吸附材料中残留的漂洗液；
注意：此步骤目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除，漂洗液的残留，可能会影响后续的 RT 等实验。
11.将吸附柱转移至新的RNase-Free离心管中，向吸附膜的中间部位悬空滴加 30~100μLRNaseFree ddH2O，室温静置2 min，12,000×g离心1min，得到 RNA溶液，将洗脱的RNA溶液置于-80℃保存。
仅用于科研，不能用于临床诊断！所有产品仅供科研使用，动物组织/细胞总RNA提取试剂盒(双柱型)不得用于其他用途。

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